用这个克隆号的CD3做胞内染色，能区分sCD3-T和NK淋巴瘤

niwanmao

尽管T细胞和NK细胞是由共同淋巴祖细胞产生，但它们有许多差异。正常的T细胞在胸腺中发育，表达表面CD3（sCD3），是CD2+ CD5+ CD7+ CD16-/+ CD56-/+，并显示出重排的T细胞受体（TCR）基因。相比之下，正常的NK细胞在骨髓中发育，缺乏sCD3表达，CD2+ CD5- CD7+ CD16+ CD56+。NK细胞相关标记，包括CD16，CD56，CD57，CD94/NKG2和杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR），已被用于鉴定NK细胞肿瘤。但是，这些与NK细胞相关的标志物也可以在正常的反应性T细胞和某些T细胞肿瘤中表达，例如T细胞大颗粒性淋巴细胞白血病和肝脾T细胞淋巴瘤。当肿瘤性T细胞失去sCD3表达或肿瘤性NK细胞获得CD5表达时，将T细胞与NK细胞肿瘤区分开可能会更加困难。对于没有其他辅助测试或临床信息可参考的流式细胞术实验室，这可能尤其成问题。因此，迫切需要可靠，简单，快速的流式细胞术来区分T细胞和NK细胞肿瘤。

CD3是T细胞谱系定义标记，它是免疫球蛋白超家族的成员，由CD3ε、δ、γ和ζ链组成。 4条胞质CD3（cCD3）链与TCR非共价结合，在正常T细胞的细胞表面上形成CD3/TCR复合物，但在其他细胞类型中则没有这种结构。这种表面CD3/TCR复合物对于正常的T细胞发育、分化和激活至关重要。**在T细胞的细胞质内，在组装CD3/TCR复合物之前会形成2个异二聚体（CD3ε/γ和CD3ε/δ）。尽管成熟的NK细胞具有cCD3，但它们只包含CD3ζ或CD3ε单链**，在成熟的NK细胞中未检测到CD3ε/γ和CD3ε/δ异二聚体。单克隆CD3抗体克隆SK7/Leu-4是流式细胞术中广泛使用的抗体，该抗体的一个经常被遗忘的特征是它能特异性结合T细胞中的cCD3ε/γ和/或CD3ε/δ异二聚体，但不结合NK细胞中的游离CD3ε。

这里，我们来看一下SK7/Leu-4克隆号的CD3，做胞内染色，区分sCD3-T细胞肿瘤和NK细胞肿瘤的效果。

这是19例sCD3- T-NHL的表型特征，均为sCD3-而cCD3+（SK7/Leu-4克隆号）：



下面看其中几个病例的图，A图是外周T细胞淋巴瘤（NOS）患者的流式细胞仪免疫表型，即表中第15个病例，肿瘤细胞（红色）为sCD3–CD4–CD8–CD2+ CD7+，强表达cCD3。 TCRβF1的免疫组织化学研究为阳性（数据未显示）。同时显示了正常CD4 + T细胞（紫色）和正常的CD8 + T细胞（棕色）。 B图是另一例外周T细胞淋巴瘤（NOS），肿瘤细胞（红色）的免疫表型（表中第18号病例）类似于NK细胞的免疫表型，因为sCD3–CD4–CD5– CD2+ CD7+ CD8+。但是，肿瘤细胞cCD3阳性。克隆性T细胞受体基因重排证实了T细胞谱系（数据未显示）。



上面两个相对好一点，C图是一名肝脾T细胞淋巴瘤患者（表中病例19）显示，由于CD2+ sCD3-CD4-CD5-CD7（dim）CD8（dim）CD16partial CD56+ CD94+，并且有多个KIR限制性表达，假如到此为止，可能很多人会判为NK细胞。但肿瘤细胞均对cCD3呈阳性。通过TCRβF1表达通过免疫组织化学进一步证实了T细胞谱系（数据未显示）。



那么在NK肿瘤中表现如何呢？
下表是13例NK细胞肿瘤表型结果：


其中的例5和例10，图形如下，依次对应图D和图E，两者均CD2+sCD3–CD7+CD16+CD56+，但例5（D图）CD5-CD8-，例10（E图）CD5partial CD8+：



尽管特异性相当之高，但还是可以看到这13例NK细胞肿瘤中，有2例患者存在胞浆CD3部分表达。

以第12例慢性NK细胞增殖性疾病为例，肿瘤细胞(蓝色)显示典型的NK细胞表面抗原表达：CD2+sCD3-CD5-CD7+CD16+CD56+CD57+，CD158e限制性。然而，却部分表达cCD3（A图），细胞谱系无法明确。B图为分选CD16+CD56+cCD3+细胞和CD16+CD56+cCD3-细胞进行TCR基因重排研究，
以血液DNA为阳性对照(右)，可见左侧两个细胞亚群都没有TCR重排产物(左)，因此不支持T细胞谱系，而应判为NK细胞。


由此可见，SK7/Leu-4克隆号的CD3抗体做胞内染色，可以解决绝大部分sCD3-T细胞淋巴瘤和NK淋巴瘤的鉴别，甚好！


参考文献：Shi, Min et al. “Cytoplasmic Expression of CD3ε Heterodimers by Flow Cytometry Rapidly Distinguishes Between Mature T-Cell and Natural Killer-Cell Neoplasms.” American journal of clinical pathology vol. 154,5 (2020): 683-691. doi:10.1093/ajcp/aqaa086

JenniferLiu

老师，我想请问一下，段落前面的※号是什么意思呀？

niwanmao

JenniferLiu 发表于 2023-5-25 01:18
老师，我想请问一下，段落前面的※号是什么意思呀？

段落前面没有这个花形符号啊，你指的是不是句子中的**号？那个是我写的时候加粗的markdown符号，在微信公众号编辑器兼容，在论坛编辑器中没兼容，当时发布的时候忘记删了。