淋巴细胞表面直接标记与间接标记的抗体染色顺序问题

家的感觉

大家好！关于PBMC表面标记多色标记，总共有三个抗体A、B、C，均为mouse anti-human，其中A、B为直接标记抗体，C为间接标记抗体，D为间接标记抗体的二抗（rabbit anti-mouse）。那么A、B、C三个抗体如何标记：1、先标记A、B、C，后标记二抗D？
2、先标记A、B后再标记C，最后标记二抗D？
3、先标记C，然后标记二抗D，最后再标记A、B？
4、都不合适，均无法避免D与A、B、C的结合？
大家有没有遇到过类似的情况，应该如何处理才能避免非特异结合，谢谢！

wuxiu5600

先标C、D，多洗几遍再标A、B，非特异可能会小点。不行就重新买rat anti-human 的抗体吧，或者买个kit先把C标记上。

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wuxiu5600 发表于 2021-6-28 10:31
先标C、D，多洗几遍再标A、B，非特异可能会小点。不行就重新买rat anti-human 的抗体吧，或者买个kit先把C ...

谢谢回复~~
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