Annexin-V-FITC双染凋亡流式图分析的请教

薄荷

请老师帮忙分析一下：以上四个图依次是对照组，加药组，凋亡是增加了（除了最后一个加药组），感觉正常活细胞团在右移，这样对吗？还有这几个图分群什么的合理吗？补偿或者检测设置的电压对吗？流式新手，问的问题也许不合理，请老师谅解。我的实验操作步骤是：胰酶收集细胞后用pbs洗一遍，加入缓冲液100微，FITC.PI各5微，孵育15分钟，再加入缓冲液400微后上机

niwanmao

薄荷 发表于 2021-8-5 14:12
看了的，不太懂流式，当时没太明白您的意思，还想请教一个问题：细胞分群不明显原因只有染料未染上吗，跟 ...

你这里的图形显示，只有染料没染上的问题。与其它无关。

niwanmao

Annexin V没有染上。

薄荷

niwanmao 发表于 2021-8-4 15:24
Annexin V没有染上。

谢谢老师！请问您说的是所有组Annexin-V都没有染上吗？ 这个怎么判断出来的，我的方法步骤对吗，怎么改进呢。另外老师再帮我看下下面的图染上Annexin-V了吗？

niwanmao

薄荷 发表于 2021-8-4 21:19
谢谢老师！请问您说的是所有组Annexin-V都没有染上吗？ 这个怎么判断出来的，我的方法步骤对吗，怎么改进 ...

如果染上，一般类似于《BD Annexin V-FITC/PI 凋亡检测，实验组无早凋只有晚凋》https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-9259-1-1.html 这样。

PS：上传图片，请务必通过高级模式下的“图片”工具栏上传，我发现你发帖时的图片，估计是直接拖进去，导致图片全部以十六进制保存在帖内，经常无法显示。目前的图片都是我通过管理员权限另存为才显示出来的。

薄荷

niwanmao 发表于 2021-8-4 21:27
如果染上，一般类似于《BD Annexin V-FITC/PI 凋亡检测，实验组无早凋只有晚凋》https://www.flowcyto.cn ...

老师 您的意思是正常凋亡应该晚凋多于早凋，还是晚凋比例太低判断Annexin-V未染上，？延长Annexin-V孵育时间可以改进吗？   第一次发图片没有经验，下次发图片记得啦，谢谢老师提醒。

niwanmao

薄荷 发表于 2021-8-4 22:04
老师 您的意思是正常凋亡应该晚凋多于早凋，还是晚凋比例太低判断Annexin-V未染上，？延长Annexin-V孵育 ...

不是要求哪期凋亡多，而是要求分群明确。我发的链接你看过了吗？

薄荷

niwanmao 发表于 2021-8-5 09:16
不是要求哪期凋亡多，而是要求分群明确。我发的链接你看过了吗？

看了的，不太懂流式，当时没太明白您的意思，还想请教一个问题：细胞分群不明显原因只有染料未染上吗，跟电压和调节补偿有关吗

薄荷

niwanmao 发表于 2021-8-5 15:14
你这里的图形显示，只有染料没染上的问题。与其它无关。

嗯嗯 好的  谢谢老师的解答