流式多色染色问题

飞翔

今天染色，用的7-AAD，CD45-APC-Cy7、CD3-FITC、CD19-APC、CD138-PE、CD45R-PE-Cy7，最后结果有一些问题，多出来一群有问题的群（红圈内的），是什么原因呢？补偿不适合？还是染料在一起不适合，有染料断裂？有人说是染料聚集？这个染料聚集是什么,怎么导致的呢？

niwanmao

这是多色流式的缺陷。无法避免，只能手动去除。

飞翔

好吧，出去也不太容易

wxd

试试更换抗体组合，不要让PE和PE-Cy7出现在同一个细胞上，同时避免用PE和PE-Cy7坐标系分析细胞比例。出现这种情况的原因是：PE-Cy7在被488 nm激光器激发时，会发出两种荧光，即PE的荧光和Cy7的荧光，也就是这个染料可以被PE通道和PE-Cy7通道同时检测到。具体可以看一下图片，图中黄色填充的是PE的发射光，红色填充的是PE-Cy7的发射光。