流式检测凋亡关于FSC，SSC圈门的疑问

zhang1331

人结直肠癌细胞HT29，放疗后3天组与未处理组相比，FSC-SSC左下角细胞群明显增多，请问分析时，左下角这部分细胞碎片要圈进去吗？如果不圈的话，放疗后3天组P1门所占比例有点低。
另外还想问下，FITC-PI图中，上面象限的细胞分成了平行的两群是为什么？谢谢

niwanmao

1、门的左下是碎片区域，所以不应该圈。应该圈的是目前的门+门左侧的（不是左下），只有FSC减小，但SSC不变或略增的是可以圈的。
2、FITC/PI图上，上面两个象限的细胞所谓的分群不要紧，不用管的。

wxd

FITC/PI图中，上边两个象限之所以分群是因为PI染的是死细胞的细胞核，而凋亡的细胞中，既有分裂期细胞，又有分裂间期细胞，导致产生类似细胞周期的散点图。如图中所示，左边是一个细胞周期检测实验（PI染色）样品的散点图，右边是同一个数据的峰状图。
如果楼主有兴趣，可以做一下正常培养的HT-29细胞的细胞周期。检测凋亡的时候，可以多收一些楼主圈出来的细胞（不少于3万个），对这群细胞进行细胞周期分析。二者对比，可以分析处于哪个细胞周期阶段的细胞凋亡多一些。如果不感兴趣，可以忽略。