请问直接用病毒蛋白刺激小鼠脾脏细胞可以吗？

菠萝妹

实验室的方法是将小鼠脾脏细胞制成单细胞悬液后过夜孵育，然后加10ug病毒蛋白进行刺激6h，做了之后效果不好，细胞因子IL-2/4/5/TNF/等浓度较低，需
要重新摸刺激条件，在网上看的
这个方法可以使用吗？需要加蛋白质转运抑制剂、PMA、离子霉素吗？

niwanmao

蛋白转运阻断剂都需要的。具体的用量和组合，根据要研究的因子不同可进行相应优化，站内以前发过相关的资料：
细胞因子胞内染色的相关刺激方案
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-716-1-1.html
(出处: 流式中文网)

菠萝妹

niwanmao 发表于 2021-11-11 08:17
蛋白转运阻断剂都需要的。具体的用量和组合，根据要研究的因子不同可进行相应优化，站内以前发过相关的资料 ...

老师，请问有上清的流式protocol吗？试剂盒是CBA的，测上清中的细胞因子

niwanmao

菠萝妹 发表于 2021-11-11 16:23
老师，请问有上清的流式protocol吗？试剂盒是CBA的，测上清中的细胞因子

啊，你上面是要测上清？那是不需要阻断的。
CBA试剂盒里面就有对培养上清的Protocol的，我们之前转发过：
PMG系列5：BD CBA操作流程
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3023-1-1.html
(出处: 流式中文网)

菠萝妹

niwanmao 发表于 2021-11-11 08:17
蛋白转运阻断剂都需要的。具体的用量和组合，根据要研究的因子不同可进行相应优化，站内以前发过相关的资料 ...

老师，看了您测定的样品是血清，我们要测细胞上清中细胞因子的含量，请问用蛋白刺激可以吗？是否需要加佛波酯 PMA和钙离子霉素刺激呢？

niwanmao

菠萝妹 发表于 2021-11-13 14:14
老师，看了您测定的样品是血清，我们要测细胞上清中细胞因子的含量，请问用蛋白刺激可以吗？是否需要加佛 ...

测细胞上清的步骤是一样的。
你如果需要做阳性对照，PMA+离子霉素可以的，此时阻断剂就不需要了。