CFSE染色问题

baicaikua001

主要就是使用CFSE染色PBMC然后流式检测增值峰，目前的问题是我们用CFSE染色，大部分时候会染色失败，我们将染色的PBMC和未染色的PBMC检测，发现FITC通道荧光信号几乎没什么差别，目前还没找出原因。     我们将染色的PBMC和未染色的PBMC检测，发现FITC通道荧光信号几乎没什么差别

具体操作步骤如下：
                                取密度梯度离心法分离的PBMC，生理盐水洗涤3次。
                                使用PBS将CFSE母液调整之终浓度0.2uM和2uM，并用此溶液调整BMC浓度至1*10^7/ml
                                37℃避光孵育15min
                                方入5倍体积的预冷的完全培养基（10%FBS），放入4℃冰箱孵育10min
                                孵育完成后取出直接离心取上清，再用生理盐水洗涤2次
                                生理盐水重悬送流式检测
不知道那个环节出问了，总是染不上，求解答

niwanmao

浓度太低了，而且这个加法应该是有问题的。
参考：
CFSE检测细胞增殖详细protocol
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4562-1-1.html
(出处: 流式中文网)

baicaikua001

niwanmao 发表于 2022-2-10 12:07
浓度太低了，而且这个加法应该是有问题的。
参考：
CFSE检测细胞增殖详细protocol

那个帖子积分要50，我积分才45看不了

niwanmao

baicaikua001 发表于 2022-2-10 15:58
那个帖子积分要50，我积分才45看不了

CFSE终浓度尽量在5~10uM，可做一下摸索，找到一个比较适合你们细胞的浓度。