胞内因子刺激实验,门的位置能微调吗？

cnynjn2007

各位老师：
    我在做胞内因子刺激实验时，同一个样本设置了了阴性对照（加DMSO），阳性对照（加PHA），和实验组（加抗原肽刺激），其中偶尔几个样本的个别细胞因子会出现阴性对照的细胞群的位置高于阳性对照和实验组，如果以阴性对照来画门，会导致阳性对照和实验组的目标细胞比例均低于阴性对照，如下图所示，这种情况是由于什么原因导致的呢？能够调整阳性对照和实验组的门的位置吗，还是必须以阴性对照来画门?

cnynjn2007

这是圈门的顺序，三组前面总图都没什么太大区别，恳请论坛上各位经验比较丰富的老师指点！！

niwanmao

如果偶尔几个样本的话，需考虑获取时的不稳定吧，不过为什么阳性对照也没有信号出来？

其实最好的做法是barcoding，然后再将三个样本混在一管中，再进行染色。可保证背景信号的一致性。

cnynjn2007

niwanmao 发表于 2022-3-21 19:23
如果偶尔几个样本的话，需考虑获取时的不稳定吧，不过为什么阳性对照也没有信号出来？

其实最好的做法是ba ...

恩恩，感谢倪老师的回复，您说的barcoding标记确实是个好办法，不过我们可能实验条件不允许，这个胞内因子的实验，真正做起来还是有很多问题的