细胞染色不稳定

shiyisyl

各位老师好，
以下是我前后两次实验的染色结果，染色步骤、方法一样，但是B220一次染上了，一次没染上。之前染色液出现过这种情况，不知道具体什么原因
难道是抗体克隆号的原因吗，抗体克隆号是：RA3-6B2

shiyisyl

就发现，第二次做的实验（第二张图），CD45染色不好，B220大部分在dead细胞中，不知道原因。

niwanmao

shiyisyl 发表于 2022-6-13 09:44
就发现，第二次做的实验（第二张图），CD45染色不好，B220大部分在dead细胞中，不知道原因。 ...

第二次的CD45分群分不开，说明结果是需要怀疑的。究竟是染色没染好？还是仪器一过性异常，得逐一排查。

liuruiluna

第二次的这个死活，为什么全都圈上了？ 应该只圈左边那群吧。还有这是什么样本呢，如果是血液、骨髓、脾脏这些样本，如果红细胞去除的比较干净， CD45基本都阳性也正常的，

shiyisyl

liuruiluna 发表于 2022-6-16 12:10
第二次的这个死活，为什么全都圈上了？ 应该只圈左边那群吧。还有这是什么样本呢，如果是血液、骨髓、脾脏 ...

live-dead都圈上，是为了看反圈的效果

shiyisyl

niwanmao 发表于 2022-6-13 12:21
第二次的CD45分群分不开，说明结果是需要怀疑的。究竟是染色没染好？还是仪器一过性异常，得逐一排查。 ...

思考了最近两次的实验，推测：可能是样本制备的不好，Bc在刺激后大部分死了。
1. 问题一：这两次采用裂红处理细胞，索莱宝的裂红液，加入PBS终止裂红后，有蓝紫色不溶沉淀产生，计数细胞发现数量和活率没变化。但是细胞在4℃放置不到2天，就都聚团死了（以前的样本放2天，大部分依旧分散的单细胞）。严重怀疑裂红液的问题。

2. 用过几次达优的淋巴细胞分离液，制备的样本计数时发现细胞活率很低，不知道为什么。

niwanmao

shiyisyl 发表于 2022-6-17 20:30
思考了最近两次的实验，推测：可能是样本制备的不好，Bc在刺激后大部分死了。
1. 问题一：这两次采用裂红 ...

很多试剂，还是尽量买质量好的。
红细胞裂解液，可以自己配制氯化铵的，心里有数，做起来不慌。
ficoll，还是买GE的吧。

shiyisyl

niwanmao 发表于 2022-6-18 09:11
很多试剂，还是尽量买质量好的。
红细胞裂解液，可以自己配制氯化铵的，心里有数，做起来不慌。
ficoll， ...

倪老师，请问GE的ficoll是哪款呢？我看网上好几种。
另外，想问下，Percoll和Ficoll哪个更好呢？

niwanmao

shiyisyl 发表于 2022-6-18 13:24
倪老师，请问GE的ficoll是哪款呢？我看网上好几种。
另外，想问下，Percoll和Ficoll哪个更好呢？ ...

1.077的那款