求助：分离出组织细胞中的线粒体，还能用流式检测吗？

yxyyjs

实验需要分离组织中的线粒体，进行线粒体的WB和膜电位检测。不知道分离提取之后的线粒体，还能用类似JC-1试剂盒通过流式检测膜电位吗？

wxd

用流式细胞仪直接检测纯化后的线粒体，有三个关键点：1. 纯化线粒体所用的试剂盒是否能保持线粒体的活性。这个需要查看说明书或者咨询试剂盒厂家的技术支持；2. 在FSC/SSC坐标系中将线粒体团识别出来。这个可以通过调整FSC阈值，并将坐标系调整为对数实现（我们在日常工作中用流式细胞仪检测细菌死活等也是这么操作的，可以大致将细菌和其他杂质区分开）。2. 线粒体膜电位染色液是否适合染色纯化后的线粒体。这个需要查询所用试剂盒的说明书。解决这些问题，就可以尝试做预实验了。

niwanmao

分离出的线粒体，应该是适合检测其组成蛋白吧。

至于膜电位，还是需要在细胞完整的情况下，并且新鲜采集时做，尽量保证线粒体膜的完整性和电势正常。

yxyyjs

niwanmao 发表于 2022-7-11 16:43
分离出的线粒体，应该是适合检测其组成蛋白吧。

至于膜电位，还是需要在细胞完整的情况下，并且新鲜采集时 ...

谢谢

yxyyjs

wxd 发表于 2022-7-12 12:20
用流式细胞仪直接检测纯化后的线粒体，有三个关键点：1. 纯化线粒体所用的试剂盒是否能保持线粒体的活性。 ...

谢谢