JC-1线粒体膜电位问题请教

dkk

    各位老师，因为之前没接触过流式，所以不太清楚怎么处理JC-1流式数据图，我按照之前帖子的方法处理数据，但我用的Flowjo软件好像是自动调节补偿，修改不了补偿，不知道我处理的结果图对不？并且我的实验结果好像没差异？图1为对照组（细胞+JC-1探针）；图2为cccp 50uM处理4h的阳性对照组；图3-6为药物处理组。
    我的处理条件是：6孔板等细胞长满胰酶消化后，用10uM的JC-1（四正柏公司）处理15min，处理完后离心（离心后发现染料也离心下来了，这可能跟之前JC-1没有过滤有关，不知道这一步有没有影响）。
    另外，我看别人的流式图细胞都比较集中，为什么我的细胞很分散的感觉，所以想请老师们帮我分析一下，谢谢！

wxd

这个结果看起来大致是正常的。不正常的地方在于CCCP处理组，根据试剂盒描述，CCCP组处理后细胞线粒体膜电位会消失，即Q3象限的细胞比例应该比对照组高很多，但是这个数据看起来没有变化。出现这个现象的原因可能是你处理时间太长了，或者CCCP失效了，我们正常检测是用10 μM处理20 min，一般是可以得到阳性结果的。数据分析时注意根据细胞分群进行画门，即从两团细胞之间画门从而将细胞分开，你这个画门方式，使Q3象限多了很多本不属于该群体的细胞，掩盖了结果的差异。至于你说的细胞集中和分散的问题，跟每个人所用细胞，检测仪器以及检测时的电压设置等都有关系，只要不出现主细胞群压线的情况，并且细胞分群清楚，都是比较好的检测结果。

dkk

wxd 发表于 2022-7-26 17:38
这个结果看起来大致是正常的。不正常的地方在于CCCP处理组，根据试剂盒描述，CCCP组处理后细胞线粒体膜电位 ...

明白了 我再试试 真的太感谢您了