本帖最后由 XY星雨XY 于 2018-11-14 14:37 编辑
大家好！请教下关于流式的问题，准备用流式测定血小板活化，即检测CD62P的表达。图片中是文献的方法和结果，不太明白：测定CD62P表达，只用anti-CD62P-PE一个抗体不可以吗？为何还要用anti-CD42b-FITC这个抗体呢？另外结果中材料组和阳性对照组差不多，感觉不太靠谱呢？ 还有就是最后用的Mouse IgG-PE这个同型对照，具体实验过程中该如何添加呢？
下面是我的实验方案，不知道是否合理，第一次做不太懂，还望大神们指导一二！
1、从医院采集新鲜柠檬酸抗凝全血，100g离心5min。
2、收集上清富含血小板血浆于离心管中，带回实验室中（路程需20min），在实验室用PBS按体积比1:1稀释 过程是否需要低温？
3、血小板悬液90μL与10μL不同浓度悬浮在PBS里的六种超顺磁氧化铁纳米材料孵育30min。室温？37度？
4、孵育后，取10μL的混合液稀释于90μL HEPES缓冲液中。（做3个平行，共取30μL，分别稀释，或者更多平行？）
5、避光加入5μL anti-CD62P-PE和5μL anti-CD42b-FITC（是否需要低温，可否只加一种抗体）
6、流式测定血小板激活的标志物CD62P（P-选择素）的表达量。
注：阳性对照为牛凝血酶（1U/mL，溶解在PBS里？）、阴性对照为PBS，处理同样品组。
这里涉及双阳、双阴和单阴吗
文献里鼠IgG-PE作为非特异性结合对照，我该怎么设置呢？
求大神指导！多谢啦！
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发表于 2018-11-14 11:17:24
