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CD19 CAR-T治疗后,B-ALL患者的MRD监测11色方案及其设门逻辑解析

发布者: niwanmao | 发布时间: 2022-11-20 21:52| 查看数: 66| 评论数: 0|帖子模式

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在CAR-T 治疗后,1/2的B-ALL患者出现 CD19 下调。由于 CD19 阴性的发生率较高,有必要寻找具有相似诊断价值的抗原替代 CD19 作为主要的B系抗原。在大型 BCP-ALL 儿童患者队列 (n = 519) 中检测了CD22、CD24、CD10和细胞内 (i)CD79a 的初始表达,结果发现,这些CD分子的表达率相当高,约88.9%(CD22)、83.7%(iCD79a)、88.2%(CD10) 和94.7%(CD24) 的患者几乎所有肿瘤细胞(白血病细胞表达率均超过95%)均表达检测这些抗原。而且,超过95%的患者,几乎所有的原始细胞上都表达了至少一种上述标记物。因此,建议在常规抗体组合中加入**CD22、CD24和iCD79a**。

根据此思路,Mikhailova等人在2022年11月5日的Cancers (Basel)杂志上发表了一个11色方案,在CD19 CAR-T治疗后的患者中具有极强的可用性。

方案如下:
截屏2022-11-20 16.39.13.png

MRD分析的逻辑如下图,主要思路为采用CD22 和 iCD79a对B细胞进行设门(一种或两种),如果两者均未强表达(弱或部分阳性),则使用CD10或CD24进行B细胞设门,CD24虽然成熟中性粒也可表达,但可通过CD45、SSC排除掉,至于确认白血病细胞的方法,有LAIP和DfN两种方式,DfN是优先推荐的:
截屏2022-11-20 16.40.38.png


但在 DFN 方法的应用中也存在几个陷阱,因为DfN方法是基于对正常 B 细胞分化模式的理解,从散点图上的“空白区域”找白血病原始细胞,但是这些“空白区域”在哪里,是否存在,完全取决于B细胞设门标记的选择,如果仅使用 CD22 设门,CD22+细胞群将会包括以下正常细胞:CD22阳性的嗜碱性粒细胞、浆细胞样树突状细胞 (PDCs)、各阶段的BCP和成熟B细胞。如果仅应用iCD79a,则所谓的“B细胞”区域还会把浆细胞圈进去。如果利用两种标记物的逐级设门,则可选出正常的BCP(CD19阳性和 CD19 阴性)和成熟B细胞作为 MRD 分析的正常背景。

值得注意的是,CD19 CAR-T治疗后正常CD19阴性BCP的相对扩增可使这些细胞较为常见,应避免将其误解为CD19阴性复发。

下图是MRD分析策略的实际应用,下图联合使用 CD22 和 iCD79a 进行 B 细胞设门,从而进一步进行MRD分析。第一行是设门步骤,第二行和第三行显示散点图上CD22(+)iCD79a(+) 细胞的定位。淡蓝色,总B细胞门;红色,白血病细胞;绿色,CD19(+)BCPs;紫色,CD19(-)BCPs;深蓝色,成熟 B 细胞;灰色,其他细胞。
截屏2022-11-20 21.34.17.png


Mikhailova, E. et al. Reliable Flow-Cytometric Approach for Minimal Residual Disease Monitoring in Patients with B-Cell Precursor Acute Lymphoblastic Leukemia after CD19-Targeted Therapy. Cancers 2022, 14, 5445. https://doi.org/10.3390/cancers14215445

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