流式表面染色与胞内染色问题

liuyang

各位老师，我想问一下，我想T细胞染胞膜与胞质蛋白，胞膜采用的是biotin间接标记的方式来看MHC I，即先染biotin，再用SAV来标记，而胞质需要固定打孔采用直接标记抗体，那我采用的先后顺序应该是怎么样的呢？就是我怕我先染胞膜间接标记的话，后续固定打孔会有影响胞膜的间接标记。如果先固定打孔，对MHC I间接标记有影响吗？请各位老师指教

niwanmao

MHC I的抗体，很容易找到直标抗体，尽量采用直标抗体。这是建议。

如果坚持要用，一般是建议先染表面标记，再固定、破膜后染胞内抗体，因为已特异性结合了表面位点，故不受影响，除非破膜剂过于剧烈影响了表面，绝大多数商品化破膜剂还是可以的。

liuyang

niwanmao 发表于 2022-11-28 22:35
MHC I的抗体，很容易找到直标抗体，尽量采用直标抗体。这是建议。

如果坚持要用，一般是建议先染表面标记 ...

好的，谢谢老师指点