流式杂谈和进展

551 liuyang LV2

悬赏 1 流星 未解决
各位老师,我想问下细胞固定完之后可以放在-80度冰箱吗,我用的是BD 5×lyse/Fix Buffer(在附件里

558049.pdf  (2022-12-1 20:48 上传)

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),不知道这个试剂放到-80度会结冰吗,可能要存放很长时间,而且我想染胞膜与胞内蛋白,但是由于胞内抗体还没到货,细胞也养的差不多了,我想的是先固定完放到-80度,然后等抗体到了再打孔染胞膜与胞内的蛋白,但是我看大家一般都先染胞膜再染固定打孔染胞内,所以现在有两个问题,第一个如何固定保存细胞存放的问题,第二是先染胞膜再固定放到-80度,等胞内抗体到了再染胞内还是直接把细胞冻存不染抗体比较好?谢谢各位!
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有 7 条回复

2楼 niwanmao 管理组

真要保存,还是建议按照程序降温的方式加入冻存液,冻到液氮里面去。

3楼 srfts LV4

我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理,放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化,大概稳定可放1个月以上。

4楼 niwanmao 管理组

引用: srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理,放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化,大 ...

等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧?嗯,这样的话有一定的可行性,不过不知道是否做过与新鲜样本的对比呢?

5楼 srfts LV4

引用: niwanmao 发表于 2022-12-5 20:48
等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧?嗯,这样的话有一定的可行性,不过不知道是否做过与新鲜 ...

老师我们做过的  这个是稳定性验证。是先做了新鲜样本作为基线,剩余的使用上面步骤处理,然后每隔一段时间跑一次流式 然后与基线对比。暂时做到1个月是稳定的。

6楼 srfts LV4

引用: niwanmao 发表于 2022-12-5 20:48
等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧?嗯,这样的话有一定的可行性,不过不知道是否做过与新鲜 ...

是的 是胞内胞外一起染

7楼 niwanmao 管理组

引用: srfts 发表于 2022-12-5 22:03
老师我们做过的  这个是稳定性验证。是先做了新鲜样本作为基线,剩余的使用上面步骤处理,然后每隔一段时 ...

感谢反馈,这样对于大家使用这种应急方式有了一定信心。

8楼 liuyang 楼主

引用: srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理,放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化,大 ...

好的,谢谢