流式杂谈和进展

408 niwanmao 管理组


有站友发现,流式数据转换(双指数、Logicle、Hyperlog 等)后,常会显示负值。大家就会在想,为什么荧光强度会出现负值?负值有意义吗?

20230410_210930.png  (2023-4-10 21:10 上传)

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我们先来看看,负值究竟是怎么产生的。

实际上,我们在流式图上看到的,并非是真实的荧光绝对值,而是经过仪器固件和软件校正后的测量值,也就是说,该测量值是实际荧光值减去“基线”值得到的结果。 然而,实际荧光值和基线值的测量都存在误差。 因此,对于“阴性”细胞(荧光很少或没有荧光的细胞),由于这些误差的存在,导致实际荧光值可能会小于基线的测量值,那么相减后,最终测量值就会小于零。
同样,由于补偿的存在,来自所有补偿通道的测量误差也会被汇入最终计算值,也会导致相关通道检测值小于零。

因此,我们最后再来总结一下,荧光强度的负值,并不是双指数、Logicle、Hyperlog等算法计算的结果,而是由于扣除基线值、补偿这两类原因引起的。

如果你在分析时进行了过度补偿,或者设门时主要选择了荧光强度小于零的事件,那么对该群体的的任何统计值(中位数、平均值、几何平均值)都将为负数。
如果这些统计值远远小于零,则存在过度补偿问题(此时的MFI将不可信)。
如果该值接近于零,那么可能只是偶然(结果仍是可信的)。


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