组织流式

angellisa

想问一下老师们，我做小鼠的肺组织流式，采用I型胶原酶和DNaseI消化组织，37度100RPM摇床37分钟，得到的悬液十分粘稠，过70um筛离心后又黏一坨的分不开，是我的消化酶没选对吗，求助

niwanmao

消化前是这个样子的吗？

angellisa

niwanmao 发表于 2024-2-26 08:31
消化前是这个样子的吗？

消化前的照片我忘记拍了（哭，不过大概是这样，我捡碎了以后加消化酶放在小皿里37度摇床消化30min，这是已经消化后的样子，还是和没消化前一样是块块，不过看起来稍微松了一些。第二张图片是消化后过筛500g离心，就是黏黏的液体，离心不下来，取少量离心后就是帖子开始那种粘稠的一坨

niwanmao

angellisa 发表于 2024-2-26 09:24
消化前的照片我忘记拍了（哭，不过大概是这样，我捡碎了以后加消化酶放在小皿里37度摇床消化30min，这是 ...

这个时候，你用注射器非针头那一侧，在滤网上磨一下过滤，显微镜下看一下滤液中单细胞的数量和活力（台盼蓝），也可以PI染死活上流式看看。

angellisa

niwanmao 发表于 2024-2-26 09:29
这个时候，你用注射器非针头那一侧，在滤网上磨一下过滤，显微镜下看一下滤液中单细胞的数量和活力（台盼 ...

好的老师，我过滤之前是用注射器橡胶端一边研磨一边过滤下去的，我下次技术一下活细胞。老师那我需要换消化酶吗，感觉这样黏黏的做的很不方便也损失很多细胞

niwanmao

angellisa 发表于 2024-2-26 09:53
好的老师，我过滤之前是用注射器橡胶端一边研磨一边过滤下去的，我下次技术一下活细胞。老师那我需要换消 ...

消化后，如果组织变得很粘，通常意味着细胞可能死亡的比较多，那样的话，酶是需要换。

angellisa

谢谢老师！

myy559

我们做小鼠乳腺，采取的方法是将切碎后的组织块加入胶原酶和胰蛋白酶，37°摇床25分钟，然后加入DnaseI后吹打10次。

angellisa

myy559 发表于 2024-2-28 10:55
我们做小鼠乳腺，采取的方法是将切碎后的组织块加入胶原酶和胰蛋白酶，37°摇床25分钟，然后加入DnaseI后吹 ...

谢谢您！

angellisa

朋友们我换成了胶原酶IV，现在结果好很多，不再黏黏的啦