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这篇27年前的文献,却是我们较少有人了解的领域——分选细胞器

发布者: niwanmao | 发布时间: 2024-5-9 21:38| 查看数: 338| 评论数: 0|帖子模式

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vinnie站友在论坛上问道:
用带抗体的磁珠筛选亚细胞器,然后用流式分选磁珠,把细胞器分选出来
磁珠大小是0.5-1um
请问各位老师有相关经验吗?是否可以分享一下


对于细胞器的分选,我没有做过,但我在思考,用带抗体的磁珠先去结合,再分选,似乎多此一举吧,如果有相关染料,是不是应该就能直接分选呢?不过细胞器大小确实太小了,应该难度不小吧。

于是上网开始搜相关文献,发现一篇1997年的文献「Böck, G., Steinlein, P., & Huber, L. (1997). Cell biologists sort things out: Analysis and purification of intracellular organelles by flow cytometry.. Trends in cell biology, 7 12, 499-503 . https://doi.org/10.1016/S0962-8924(97)01160-4.」给我们一些启示。我们把文中的一张染料表、一张示意流程图分选摘出来与大家分享。希望可经验的FLOWER可参与分享你的宝贵经验。

在活细胞中,可穿透细胞膜、选择性地与细胞内细胞器或细胞骨架结合的荧光探针不少,这些探针与作为细胞器标记物的特异性抗体一起,为研究人员提供了研究代谢、有丝分裂、凋亡、细胞内转运和分选、细胞骨架结构和细胞器动力学等细胞过程的有力工具,也可以帮助科研人员提取细胞器。

下表中列出了一些与流式细胞仪兼容、已成功用于细胞内应用的探针:
2024-05-09_21.19.48@2x.png


下图是流式分选细胞器的示意流程,图中,作者使用TMA-DPH{1-[4(三甲基氨基)-6-苯基六-1,3,5-三烯]}(一种瞬时结合到质膜外叶中的染料)研究内吞作用,建立了从幼仓鼠肾细胞 (BHK-21) 中纯化内体的方案,该方案将已建立的亚细胞分级分离技术与流式细胞仪中的高速细胞器分选相结合,分选后的组分显示了rab5、转铁蛋白受体和膜联蛋白 II 等内体标记蛋白的显著富集:
2024-05-09_21.20.19@2x.png

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