找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

流式中文网 门户 查看主题

你知道DRESS是啥?跟Tregs有什么关系?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2024-11-13 20:41| 查看数: 323| 评论数: 3|帖子模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?加入流式中文网

×
严重皮肤不良反应 (SCARs) 是一组罕见但可能危及生命的皮肤反应,通常由药物暴露引起,并常常需要住院治疗。史蒂文斯-约翰逊综合征/中毒性表皮坏死松解症 (SJS/TEN) 和药物反应伴嗜酸性粒细胞增多和系统症状 (DRESS) 是两种最常见的 SCARs 类型。 两组之间的临床表现和预后明显不同。

调节性 T 细胞(Tregs)在维持免疫耐受和预防自身免疫方面发挥着关键作用。  Tregs 的作用与 DRESS 和 SJS/TEN 发展过程中观察到的不同症状有关。  有报告指出,DRESS 患者在恢复后 Tregs 功能失调,而 SJS/TEN 患者在恢复后 Tregs 功能似乎恢复正常。  因此,人们认为 Tregs 的动态和功能障碍是导致 DRESS 许多症状的原因,并被认为是 DRESS 恢复后某些患者出现自身免疫后遗症的潜在关键因素。

Khanaruksombat S等人的一项研究比较了 SJS/TEN 和 DRESS 患者在急性期和恢复期 Tregs 的免疫表型、抑制功能和 mRNA 表达。  

研究发现,在急性期,无论是否出现自身免疫后遗症,DRESS 患者的 Tregs 中 CTLA-4 表达水平均显著升高。  
2024-11-13_20.36.57@2x.png

只有未出现自身免疫后遗症的 DRESS 患者的 Tregs 中 OX40 表达水平升高更为显著
2024-11-13_20.37.42@2x.png

而在 SJS/TEN 患者中,急性期 Tregs 中 IL-10 表达水平显著升高
2024-11-13_20.38.00@2x.png

为了确定Treg功能是否有异常,研究通过共培养自体Tregs 和效应T细胞,确定Tregs的抑制功能,这个步骤值得大家参考具体步骤如下:
  • 分离 Tregs 和效应 T 细胞:  使用 EasySep 人 CD4+CD127lowCD25+ 调节性 T 细胞分离试剂盒从参与者外周血单个核细胞 (PBMCs) 中分离出 Tregs (CD4+CD25+CD127− T 细胞) 和效应 T 细胞 (Teffs; CD4+CD25− T 细胞)。

2. Tregs 预激活:  将 Tregs 用抗人 CD3 (1 μg/mL) 和抗人 CD28 (2 μg/mL) 预激活过夜。
3. Teff 细胞静息:  将 Teff 细胞在 RF10 培养基(完全 RPMI 1640 培养基,含10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺、1% 非必需氨基酸、100 IU/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素)中静息过夜。
4. 包被 96 孔板:  用可溶性抗人 CD3 (10 μg/mL) 包被 U 型底 96 孔板过夜,并在使用前用 PBS 洗涤。
5. 共培养 Tregs 和 Teff 细胞: 将 CFSE 标记的 Teff 细胞 (1 × 104 个细胞) 单独培养或与预激活的自体 Tregs 以 1:1 至 1:0.25 的 Teff/Treg 比例共培养在预先包被的 U 型底 96 孔板中。
6. 重新刺激共培养细胞:  用 2 μg/mL 可溶性抗 CD28 和 200 pg/mL 重组人 IL-2(无载体)在 RF10 培养基中重新刺激共培养细胞。
7. 培养和分析:  将细胞在 37°C、5% CO2 的环境中培养 5 天,然后通过流式细胞术分析 Teff 细胞增殖。
8. 计算抑制百分比:  使用以下公式计算抑制百分比:(单独培养的 Teff 细胞的增殖百分比 - 与 Tregs 共培养的 Teff 细胞的增殖百分比)/(单独培养的 Teff 细胞的增殖百分比)×100。


结果表明:
  • 与健康对照组相比,恢复期 SJS/TEN 受试者的 Tregs 具有明显更强的抑制功能,而 DRESS 患者的 Tregs 在两个阶段的抑制功能略有受损,Treg:Teff 比例为 1:1。

在急性期和恢复期,从 SJS/TEN 患者身上收集的 Tregs 的抑制能力明显强于 DRESS 患者的抑制能力。
发生自身免疫后遗症的 DRESS 患者和未发生自身免疫后遗症的 DRESS 患者的 Tregs 抑制功能没有显著差异。

2024-11-13_20.39.20@2x.png

从以上结果可见,CTLA-4、OX40 和 IL-10 在 DRESS 患者的急性期和恢复期中发挥着重要作用,而 Tregs 抑制功能的减弱可能与 DRESS 的发病机制有关。


参考文献:Khanaruksombat S, Buranapraditkul S, Thantiworasit P, et al. Dysregulation of Regulatory T Cells and Autoimmune Sequelae in DRESS: Insights From Flow Cytometry and NanoString Analysis. Exp Dermatol. 2024;33(11):e70007. doi:10.1111/exd.70007

最新评论

niwanmao 发表于 2024-11-14 14:26:41
如山如河 发表于 2024-11-14 13:46
请问如何同时对Foxp3和IL10进行染色啊?

刺激后,用foxP3固定、破膜试剂盒,之后IL-10和foxP3一起染
如山如河 发表于 2024-11-14 13:46:41
请问如何同时对Foxp3和IL10进行染色啊?
如山如河 发表于 2024-11-14 16:19:29
niwanmao 发表于 2024-11-14 14:26
刺激后,用foxP3固定、破膜试剂盒,之后IL-10和foxP3一起染

好的谢谢大佬,下次我试试。

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-12-5 08:59

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表