氯化铵红细胞裂解液的配制

niwanmao

标题：氯化铵红细胞裂解液的配制

氯化铵红细胞裂解液（10×的储存液）

80.2 g NH₄Cl (1.5 M)
8.4 g NaHCO₃ (100 mM)
3.7 g EDTA二钠 (10 mM)

加水至900ml，然后用1N的HCl或1N的NaOH调节pH值至7.4。最后加水至1升。

该10×的储存液可在4℃保存6个月。

工作液的配制：在使用前蒸馏水稀释10倍即可。（1份储存液加上9份水）。工作液用来裂解红细胞。不能以<10×的浓度储存，否则会形成碳酸铵而失效。

niwanmao

折旗大魔王 发表于 2019-10-14 17:12
倪老师，我用您的配方试了一下感觉裂解小鼠外周血的效果不是太好，100ul血加1ml裂解液，十五分钟，离心之 ...

原材料关注一下。

折旗大魔王

niwanmao 发表于 2018-1-17 20:50
还是担心这些盐类分解，尤其是氯化铵。

倪老师，我用您的配方试了一下感觉裂解小鼠外周血的效果不是太好，100ul血加1ml裂解液，十五分钟，离心之后仍然有大量红细胞存在，这种情况应该怎么处理啊

花生小将99

niwanmao 发表于 2018-1-17 20:50
还是担心这些盐类分解，尤其是氯化铵。

请教一下，我做CTC，样本量比较多，有7-10ml左右，那么我裂红时的用量和时间怎么控制呢，现在用商品化的每次都裂解的不是很干净，裂解时间长会对肿瘤细胞有影响吗。谢谢！

niwanmao

DFL 发表于 2018-1-17 15:46
请问老师，为什么不能高压呢？

还是担心这些盐类分解，尤其是氯化铵。

DFL

niwanmao 发表于 2017-11-16 08:17
1、不能高温灭菌
2、室温裂解或冰上均可。
3、不需要避光

请问老师，为什么不能高压呢？

niwanmao

shiyue 发表于 2017-11-15 23:13
请问倪老师，您所配置这种红细胞裂解液是否需要高温高压灭菌，此外这在裂解100ul全血时，需要常温还是置于 ...

1、不能高温灭菌
2、室温裂解或冰上均可。
3、不需要避光
4、我们一般裂解10分钟。
5、不需要终止，直接离心去上清即可。

shiyue

请问倪老师，您所配置这种红细胞裂解液是否需要高温高压灭菌，此外这在裂解100ul全血时，需要常温还是置于冰上，是否要避光，裂解多长时间合适？是否需要加入PBS终止，以及这种是免洗的吗？

黄老邪

经过试验验证，发现老师的配方很好用。在24°环境下，3-5分钟即可很好裂解小鼠外周血红细胞。虽然有很多碎片，但是可以通过设置阈值来去除。本配方比国内产品效果好。感谢老师！

JennyS

niwanmao 发表于 2017-2-21 10:23
小鼠脾脏中的红细胞也是一样，但小鼠的红细胞部分样本可能裂解效果不是很好。
人红细胞裂解一般是100ul样 ...

非常感谢！！！感动！