2010年8月1日前归档

1.08 W niwanmao 管理组

标题:用Modfit分析细胞周期示例我们在用碘化丙碇染色法进行细胞周期检测时,首先要保存G1期细胞的FL2-A荧光强度位于200道左右,这样取下来的结果用Modift分析起来才准确。

如下图,在分析时,首先第一个门圈中非碎片区域;其次,第二个门在FL2-W/FL2-A图上按斜对角线区域画一类矩形区域,排除粘连体和非正常细胞;最后,在主分析图上,会出现一个双峰图,在Modfit自动分析窗口设置中,可勾选是否分析凋亡峰,并把G1、G2的峰中心位置调整到适当位置,单击自动分析按钮即可自动拟合曲线。
如果需要分析多倍体,建议勾选多倍体分析选项。
下图中diploid是二倍体的分析结果,dip g1是G1期比例,dip G2是G2期比例,Dip S是S期比例。%CV是变异度。


CellCycleModfit.jpg  (2013-12-11 19:51 上传)

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有 11 条回复

2楼 shen_coco LV2

好东西,谢谢啊

3楼 shen_coco LV2

第一个门圈中非碎片区域的时候,X轴是用FSC-H还是FSC-A呢,我看我们院的流式老师用的是FSC-A,而你图上给出的是FSC-H,两者有啥差别呢

4楼 niwanmao 楼主


X轴应该是FSC-height,至于FSC-H和FSC-A都只是显示的名称而已,不同机器显示上可能有差别,只要你分析的时候看参数是FSC物理参数就行了。

5楼 shen_coco LV2

引用: niwanmao 发表于 2011-11-30 12:55
X轴应该是FSC-height,至于FSC-H和FSC-A都只是显示的名称而已,不同机器显示上可能有差别,只要你分析的 ...

怎么看参数是物理参数啊,我用flowjo打开文件的时候发现无论选FSC-H还是FSC-A都可以看到散点图。。。

6楼 niwanmao 楼主

引用: shen_coco 发表于 2011-11-30 20:00
怎么看参数是物理参数啊,我用flowjo打开文件的时候发现无论选FSC-H还是FSC-A都可以看到散点图。。。 ...

可能我表达有问题,我的意思是说FSC和SSC都是反映细胞物理特性的参数(如FSC反映细胞大小,SSC反映细胞内颗粒)。一般我们都选FSC-H(height)。虽然FSC-A能出来,但不建议用,因为反映的是AREA-面积。

7楼 shen_coco LV2

引用: niwanmao 发表于 2011-11-30 20:47
可能我表达有问题,我的意思是说FSC和SSC都是反映细胞物理特性的参数(如FSC反映细胞大小,SSC反映细胞内 ...

意思就是说X-轴选FSC-H,然后Y轴选SSC-H咯

8楼 niwanmao 楼主

引用: shen_coco 发表于 2011-11-30 21:11
意思就是说X-轴选FSC-H,然后Y轴选SSC-H咯


是的。

9楼 shen_coco LV2

引用: niwanmao 发表于 2011-11-30 22:08
是的。另外,我不知道你用的是什么机器,如果是BD FACS CALIBUR,获取的时候控制面板上的DDM PARAMETER尽 ...

用的就是BD的机子,具体怎么操作的我也不知道,我只是把样本拿过去给流式的老师做,如果不选FSC那怎么观察细胞大小啊

10楼 haven_t LV6

某些机器(特别是早期的机器)只有荧光通道有A这个参数,FSC与SSC只有H,所以按照国际惯例用H比较多。其实两者差别不大,你用FSC-H VS FSC-A作图看看,基本成一条线。分析时其实用其中一个就够了,把两者都储存在文件中只是浪费空间而已。
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