如何检测全血中的lambda和kappa轻链

niwanmao

标题：如何检测全血中的lambda和kappa轻链

在白血病和淋巴瘤免疫分型中，我们经常会碰到检测lambda和kappa轻链的问题，跟IgM检测一样，这类免疫球蛋白的检测会受到血浆中免疫球蛋白的影响，因此在检测前需要尽可能减少血浆中免疫球蛋白的干扰。

下面推荐一个检测步骤：

1. 收集外周血标本，抗凝剂可选择EDTA、肝素或枸橼酸钠
2. 取2–3 ml 全血至25 ml的普通容器。然后加入20–25 ml  PBS/BSA （含磷酸盐缓冲液 pH 7.4 和1\% BSA，预热至37度），充分混匀。
3. 400 g 离心 5 分钟。小心的移除上清，注意不要扰动细胞团块。用残余的液体重悬细胞团块。
4. 重复步骤2、3两次。
5. 取100 μl洗涤过的全血至上样管，加入适量抗体（参照说明书），充分混匀，室温孵育30分钟。
6. 加入适量的红细胞裂解液，室温裂解10分钟。400 g 离心 5 分钟，去上清。
7. 用2 ml  PBS/BSA洗涤细胞，400 g 离心5分钟，去上清。
8. 用0.2 ml PBS/BSA 重悬细胞，如有需要，加入0.2 ml  0.5\% 多聚甲醛。
9. 上机，获取数据。

清言

版主，您好，请问检测全血中的lambda和kappa轻链对红细胞裂解液有要求吗？一个患者外周血淋巴细胞比例很高，CD19+占80%多，我做轻链检测，使用市场上的红细胞溶解液做不出来结果，于是我就先洗涤全血，再标记抗体再次试做，那群CD19强阳性的细胞找不到了，细胞很散，不知道是什么原因？这个跟电压有关系吗？我做过很多外周血标本，基本上电压都还可以的，谢谢！

niwanmao

清言 发表于 2012-10-31 18:40

                               
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版主，您好，请问检测全血中的lambda和kappa轻链对红细胞裂解液有要求吗？一个患者外周血淋巴细胞比例很高 ...

轻链检测对红细胞裂解液没有要求。

上面这个帖子是我在几年前从别的地方摘录翻译过来的，我们平时的步骤就是标本用PBS洗涤3次以上（至少3次），每次洗涤完毕都尽可能吸干净上清，最后加入PBS重悬，抗体孵育的步骤与其它胞膜抗体一样。

获取时，BD的LAMBDA、KAPPA往往会比普通胞膜抗体荧光偏高，但不需要去调节。前段时间试用了一份DAKO的LAMBDA/KAPPA的KIT，发现确实比BD的要好，主要表现在阴性细胞的位置偏移、阳性与阴性的分群等指标上。这个实话实说。至于LAMBDA、KAPPA的表达如何分析，可参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... Jl9n03PX7wJXrBGWbsk  的第3页中间这张幻幻灯（可以放大查看）。

清言

真心谢谢您，版主，参照您的建议，我再重复试验吧，祝自己顺利。。。。

sdjjcw

PBS预热的目的是什么呢？

niwanmao

sdjjcw 发表于 2013-5-9 10:36

                               
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PBS预热的目的是什么呢？

protocol翻译自：http://www.assay-protocol.com/cell-biology/sample-preparation
我们平时不预热也没问题。