抗体的滴定方法（推荐，非常重要）

niwanmao

熊峰 发表于 2019-3-16 17:36
老师为什么帖子里看不到步骤，只有注意，请问步骤在哪里看？

顶楼帖里面就是步骤啊

熊峰

老师为什么帖子里看不到步骤，只有注意，请问步骤在哪里看？

小外星人

niwanmao 发表于 2018-12-31 08:32
1、有条件尽量都做。如果少数抗体分群特别清楚（例如CD3），而且信噪比对你们实验来说不重要，那么可以不 ...

谢谢老师！明白了。

小外星人

谢谢老师！明白了。

niwanmao

小外星人 发表于 2018-12-31 07:43
请教，我要做6~7色的染色（小鼠的淋巴细胞，FITC, BUV737,BUV395,BUV605,PE,BV421,APC）,想问一下问题：
1. ...

1、有条件尽量都做。如果少数抗体分群特别清楚（例如CD3），而且信噪比对你们实验来说不重要，那么可以不做。
2、倒掉之后，可通过移液器确定剩余的液体量。
3、基本上，每个抗体都能找到高表达的细胞，例如CD138可用浆细胞、IL-17即使胞内染色，也可以清楚分群，也是一样的滴定。如果确实少数指标一下子找不到分群良好的细胞，只能暂时先用推荐量。

小外星人

请教，我要做6~7色的染色（小鼠的淋巴细胞，FITC, BUV737,BUV395,BUV605,PE,BV421,APC）,想问一下问题：
1. 每种抗体都要做滴定吗？
2.细胞染色前都要洗涤，洗涤后去上清，去上清后多少都会有液体残留，也无法精确残留液体的体积，但是按文所说重点是抗体量/染色体积，那怎样做到那么精确的体积？以前的习惯是直接将上清倒掉，剩余在管子里的液体大约是150~200ul 左右，但是其实是不准确的。
3.有些指标本来阳性率就非常低，比如CD138，或胞内染色的IL-17之类，如何进行滴定呢？

niwanmao

yaolinjuan1989 发表于 2015-11-26 20:54
问下10E6是个什么量呢？能帮我解释下吗？还有，你们每次加骨髓时，要计算下大概有多少的细胞才加多少量还是 ...

10的6次方数量需要你进行细胞计数算出来的，不是通过体积判断的。
不过，体积对于染色效果非常重要，要注意使体积控制在100ul以内比较关键。

yaolinjuan1989

问下10E6是个什么量呢？能帮我解释下吗？还有，你们每次加骨髓时，要计算下大概有多少的细胞才加多少量还是直接加50

lisa-apple

niwanmao 发表于 2015-11-24 20:10
这个其实没有要求这么严格的，如果你非要这么做也是可以的，但是没有必要：） ...

知道啦，谢谢倪老师。

niwanmao

lisa-apple 发表于 2015-11-24 10:02
倪老师，那滴定的时候比如我加20ul(我的一个BD抗体推荐用量是20ul/test),15ul,10ul等，那相应的sample量是 ...

这个其实没有要求这么严格的，如果你非要这么做也是可以的，但是没有必要：）