2010年8月1日前归档

2092 niwanmao 管理组

购买主题 本主题需向作者支付 1 流星 才能浏览
已有 4 人购买
看全部 | 倒序浏览

有 5 条回复

2楼 malizewski LV2

倪老师,做Fluo4和Fura red检测细胞内钙离子,Fura red单染阳性率比较低,Fura red和钙离子结合后荧光信号会下降,是这个原因吗?还是因为染色操作的原因导致单染管阳性率低呢?



3楼 niwanmao 楼主

引用: malizewski 发表于 2019-6-29 08:28
倪老师,做Fluo4和Fura red检测细胞内钙离子,Fura red单染阳性率比较低,Fura red和钙离子结合后荧光信号 ...

对的。
你可以采用紫光激发的FuraRed信号除以绿光激发的Fura Red信号,这个比例可以代表钙离子水平(参考文献:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4383592/
如果你这里双染,也可以用增高的Fluor 4荧光强度除以降低的Fura Red荧光强度。

pone.0119532.g001.jpg  (2019-6-29 13:46 上传)

102.17 KB, 下载次数: 0


4楼 malizewski LV2

倪老师,做外周血NK细胞胞内钙离子检测,也用的Fura red 和Fluo 4两种染料,需要把NK分选出来再染色吗?我直接分PBMC,染钙结合染料,然后加CD56和CD3抗体,直接测NK细胞胞内钙,这样可以吗?

5楼 风轻扬 LV2

引用: niwanmao 发表于 2019-6-29 13:47
对的。
你可以采用紫光激发的FuraRed信号除以绿光激发的Fura Red信号,这个比例可以代表钙离子水平(参考 ...

倪老师,我想收集人新鲜组织样本消化后,流式检测细胞基础钙离子水平,探索疾病条件下细胞内钙的变化。受样本来源所限,不可能一天检测完,需要连续测试两个月。之前用Fluo-4染同一个细胞系在同一天不同时间、不同的日期多次测钙,可能受环境温度、操作手法误差等多种因素影响,结果挺离散的,感觉不太可信。如果采用Fluo-4/Fura-red双染,488激发,FITC(530)/PerCP(675) 双通道检测,计算Fluo-4/Fura-red比率,是不是比较可行?最近见Nature Communications上有文章用共聚焦做了比率测钙,但不知道是不是同一天测试的。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7584603/

calcium-fura red-fluo 4.png  (2022-4-24 14:39 上传)

258.5 KB, 下载次数: 0



6楼 niwanmao 楼主

引用: malizewski 发表于 2019-10-13 16:57
倪老师,做外周血NK细胞胞内钙离子检测,也用的Fura red 和Fluo 4两种染料,需要把NK分选出来再染色吗?我 ...

我个人觉得最好是分选出来再做,不过你也可以试试吧,这个方式我没做过。