2010年8月1日前归档

7995 niwanmao 管理组

标题:流式细胞仪怎么区分血小板和红细胞的?

流式细胞仪怎么区分血小板和红细胞的?有没有流式图?谢谢!

回答者:niwanmao

借用网上一张现成的图解说一下:

只要在检测时把FSC和SSC均设置为Log检测模式,即可大致区分红细胞和血小板(见下图)。
其实图中标记的WBCs and RBCs这部分基本上都是红细胞。

为了更好的区分红细胞和血小板,可以加上CD61和GPA,在下面这幅图的基础上,进行第二次设门。例如,在platelets门的基础上画第二张图,选择CD61阳性的细胞,即全部为血小板;在WBCs and RBCs门的基础上画第二张图,选择GPA阳性的细胞,即全部为红细胞。这样,就能非常纯的分出这两类细胞了。

2012-08-21_203440.jpg  (2012-8-21 20:35 上传)

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2009年8月12日 0:54

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有 16 条回复

2楼 清言 LV3

尊敬的版主,最近使用流式检测红细胞上的CD55和CD59,总做不好,阳性率太低,80%左右,不知道什么原因,总觉得设门有问题,想看看您这张图红细胞和血小板方位如何,但是也看不到,请帮忙一下,谢谢!

3楼 niwanmao 楼主


OK,已重新上传图片,就是将FSC和SSC均设置成LOG模式,取最右上角那群就是红细胞。

4楼 清言 LV3

请问站长,这张图哪群细胞才是红细胞呢?上面一群还是下面一群,还是电压不够没调出来?谢谢~ 祝工作开心

5楼 niwanmao 楼主

引用: 清言 发表于 2012-8-21 20:32
尊敬的版主,最近使用流式检测红细胞上的CD55和CD59,总做不好,阳性率太低,80%左右,不知道什么原因,总 ...

@清言 我这边做CD55、CD59一直都挺好的,我们用的是BD Pharmingen的CD59 FITC和CD55 PE,因为CD55相对表达较弱,所以我选择了PE标记。在处理上,记住取10ul红细胞加入500-1000ul PBS中,然后再取10ul加入已加好抗体(20ul CD59 FITC和20ul CD55 PE)的管子中,最后加入50ul PBS使反应体积达到100ul。

6楼 清言 LV3

引用: niwanmao 发表于 2012-8-21 20:43
@清言 我这边做CD55、CD59一直都挺好的,我们用的是BD Pharmingen的CD59 FITC和CD55 PE,因为CD55相对表 ...

我也是用的同样的产品,那还需要同型对照吗?

7楼 niwanmao 楼主

引用: 清言 发表于 2012-8-21 20:43
请问站长,这张图哪群细胞才是红细胞呢?上面一群还是下面一群,还是电压不够没调出来?谢谢~ 祝工作开心 ...

哇,你们在用美天旎的MACSQUANT?这机器有点贵的。

看你获取的模式似乎是用的HYPERLOG模式,这种模式下分布可能略有不同,建议采用普通的LOG模式试试。

8楼 niwanmao 楼主

引用: 清言 发表于 2012-8-21 20:54
我也是用的同样的产品,那还需要同型对照吗?

摸索条件时可以用同型对照,同时把正常人红细胞的CD55、CD59调节到10E2左右。条件摸索成熟后,就不需要同型对照,用这个条件就可以看到如果出现CD55、CD59的降低,会出现Ⅱ类或Ⅲ类细胞。

9楼 清言 LV3

引用: niwanmao 发表于 2012-8-21 21:00
哇,你们在用美天旎的MACSQUANT?这机器有点贵的。

看你获取的模式似乎是用的HYPERLOG模式,这种模式下 ...

呵呵,我再试试吧,那请问测CD55和CD59 还需要同型对照吗? 还有使用流式进行血液病的免疫分型是否均需要进行同型对照?自身对照可否?真是麻烦版主了,谢谢谢谢~~~

10楼 niwanmao 楼主

引用: 清言 发表于 2012-8-21 21:05
呵呵,我再试试吧,那请问测CD55和CD59 还需要同型对照吗? 还有使用流式进行血液病的免疫分型是否均需要 ...

CD55、CD59条件设立好就不需要同型对照了,上面回答了。

免疫分型建议使用自身细胞内对照,因为不同患者不同细胞群阴性区域均存在一定差异,用同型对照不准确。所谓内对照,就是淋巴细胞表达的而粒细胞不表达的抗原,就用粒细胞作为阴性对照;反之,就用淋巴细胞做对照。
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