贴壁细胞PI（碘化丙啶）染色操作视频

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 21:03
不好意思，倪老师。还有个问题，我只有7AAD，想用它做hela的周期。请问它的大致浓度是多少？7AAD能和RNA ...

我看到的是25µg/ml 7AAD，跟rna会有交叉，仅供参考。

杨敏

niwanmao 发表于 2015-11-30 19:59
加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

不好意思，倪老师。还有个问题，我只有7AAD，想用它做hela的周期。请问它的大致浓度是多少？7AAD能和RNA结合吗，或者说我需要加RNAse吗

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 20:55
PBS能终止反应吗？还是只是把胰酶稀释？

加入之后马上离心，胰酶的作用我觉得应该基本上发挥不了了吧。我是这么认为的。

杨敏

niwanmao 发表于 2015-11-30 19:59
加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

PBS能终止反应吗？还是只是把胰酶稀释？

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 19:57
老师，您好!第三个步骤，消化完毕，加入PBS洗下细胞。消化完后不用终止反应，直接加PBS吗 ...

加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

杨敏

老师，您好!第三个步骤，消化完毕，加入PBS洗下细胞。消化完后不用终止反应，直接加PBS吗

sendohyozen

niwanmao 发表于 2015-9-4 19:52
不洗的。

谢谢 老师的回答！

niwanmao

sendohyozen 发表于 2015-9-3 09:32
老师您好!弱问一下,这实验我也马上要做了,以前做过峰形很难看,看视频PI这是不用洗直接上机吗?RNase也不用洗 ...

不洗的。

sendohyozen

老师您好!弱问一下,这实验我也马上要做了,以前做过峰形很难看,看视频PI这是不用洗直接上机吗?RNase也不用洗?
我以前洗着洗着 细胞都没了,好像固定后的细胞不太好离心下来的样子.....

椴树

niwanmao 发表于 2015-6-26 21:19
RFP没用过，查了下发射波长是580nm，而PI是620nm，可能在beckman仪器上还是可以调节的，BD可能比较困难。 ...

老师，我已经解决了，因为我只是转染了RFP进去细胞，在分析周期时并不需要分析RFP，所以我用乙醇固定24h后，分别加PI和不加PI，发现不加的话PI是检测不到信号的，RFP应该如你另一篇帖子说的，荧光蛋白溶出细胞外了（上回转了GFP，检测周期结果也测不到GFP，本来不知道怎么回事，现在知道了应该也是溶出去了）。但是在查乙醇固定的原理，没有找到，如果是为了打洞的话，染液中不是加入了Triton了么？想知道乙醇固定的原理，为什么乙醇固定就会溶出细胞，甲醛固定就不会。