教你分选胰岛α、β细胞

niwanmao

做内分泌研究的朋友应该知道可以用HPa3和HPi2来分选胰岛α细胞和β细胞，以进一步进行实验研究，然而，分选步骤涉及到的细胞制备、分选喷嘴的选择、设门的细节等，可能一般人都还不知道。
流式中文网在此转来Youtube一个精彩的技术型 视频，为您详细呈现胰岛α、β细胞分选的各个细节性protocol，让您看了之后，马上就能上手。

视频截图及说明：
1、流式细胞术的细胞标本制备（供分选用）：


2、续上图，流式细胞术的细胞标本制备（供分选用）：


3、流式分选仪的参数选择（包括喷嘴和分选PBS以及仪器设置）：


4、FSC/SSC散点图的图形设置方法，胰岛细胞的SSC比造血细胞小：


5、注意区分粘连体，并且要注意宁可圈小，否则容易混进与α、β细胞粘连的其它细胞



6、死活染料，这是非常重要，无论是分选还是分析都一样：


7、分选β细胞，首先要圈中HPa3阴性的细胞


8、其次再选中HPi2阳性的细胞，即为β细胞，图中两种圈法均可


9、分选α细胞，门也不能圈地太大，否则容易不纯




视频免费欣赏：

如果无法播放，请点击此处在新窗口打开

siyubai1008

niwanmao 发表于 2017-3-30 10:16
可以的！

这两个抗体我去ALPCO官网上查了一下 没有找到 还有其他公司有卖这两个抗体的吗？

niwanmao

culturelily 发表于 2015-6-3 12:40
最后一张图的补偿都没调吧

PE和APC之间没有补偿：）

dahang1992

谢谢倪老师，非常感谢！

niwanmao

dahang1992 发表于 2020-2-6 12:52
倪老师，那HPa3的全称是什么呀？我找文献都没看见

Human pancreatic antigen 3
所以简称恰好和CD41a重了。

dahang1992

非常感谢倪老师耐心的回答！

dahang1992

倪老师，那HPa3的全称是什么呀？我找文献都没看见

niwanmao

dahang1992 发表于 2020-2-6 11:19
倪老师，Novus的抗体Reactivity那里写的Hu,Mu，除了人之外，小鼠（Mu）应该也是可以用的吧？还有就是Cd41在 ...

Reactivity我看到了，但是免疫原是用人的，所以这个需要抱怀疑态度。

英文缩写要注意全称的，千万别拿别名当正名。CD41的别名Hpa3指的是human platelet antigen 3，不是你要找的HPa3。

dahang1992

倪老师，Novus的抗体Reactivity那里写的Hu,Mu，除了人之外，小鼠（Mu）应该也是可以用的吧？还有就是Cd41在它的别名那里有Hpa3,这个会不会是同样的东西呀？

niwanmao

dahang1992 发表于 2020-2-5 11:28
倪老师，试剂商帮我找到了可以做小鼠的两个抗体，它们可以做小鼠，如果这样，是不是意味着这个方法可以做小 ...

Novus这个明确写着是用人的抗原免疫小鼠的，所以产生的抗体是小鼠抗人，检测人的胰岛细胞，而不是小鼠的。
Thermo这个CD41a，并不是胰岛细胞抗原啊，这是血小板抗原。

dahang1992

谢谢您推荐的文献，我看了文献，我觉得那个很复杂，如果能用这两个抗体的话，感觉就比较简单。

dahang1992

倪老师，试剂商帮我找到了可以做小鼠的两个抗体，它们可以做小鼠，如果这样，是不是意味着这个方法可以做小鼠呀？https://www.novusbio.com/product ... 42b_nbp1-18946af488
https://www.thermofisher.com/ant ... ID=AFLCA-11-0411-85