做内分泌研究的朋友应该知道可以用HPa3和HPi2来分选胰岛α细胞和β细胞,以进一步进行实验研究,然而,分选步骤涉及到的细胞制备、分选喷嘴的选择、设门的细节等,可能一般人都还不知道。
流式中文网在此转来Youtube一个精彩的技术型 视频,为您详细呈现胰岛α、β细胞分选的各个细节性protocol,让您看了之后,马上就能上手。
视频截图及说明:
1、流式细胞术的细胞标本制备(供分选用):
2、续上图,流式细胞术的细胞标本制备(供分选用):
3、流式分选仪的参数选择(包括喷嘴和分选PBS以及仪器设置):
4、FSC/SSC散点图的图形设置方法,胰岛细胞的SSC比造血细胞小:
5、注意区分粘连体,并且要注意宁可圈小,否则容易混进与α、β细胞粘连的其它细胞
6、死活染料,这是非常重要,无论是分选还是分析都一样:
7、分选β细胞,首先要圈中HPa3阴性的细胞
8、其次再选中HPi2阳性的细胞,即为β细胞,图中两种圈法均可
9、分选α细胞,门也不能圈地太大,否则容易不纯
视频免费欣赏: