2010年8月1日前归档

2494 niwanmao 管理组

标题:请问做CD4+CD25+CD127LowTreg的详细操作步骤

niwanmao老师您好!

由于购买成套的CD4+CD25+CD127LowTreg试剂盒很贵,所以单买三个抗体及相应的同型对照,其中FITC-CD4,PE-CY7CD25购自BD公司,PE-CD127购自ebioscience公司,进行三色分析,(注我们的流式细胞仪是三色的)不知这样搭配行吗?

我想做外周血的Treg,即先用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞后,再做Treg实验,可我是新手,以前没接触过流式操作,因此想问问用提取好的淋巴细胞做Treg的详细操作步骤,请niwanmao老师帮我解决下这两个问题,不胜感激!!

回答者:niwanmao

llhlz1971,您好。

1、如果你的流式机型支持这三种染料,这样的搭配是可以的。

2、淋巴细胞不需要分离,因为在分析时通过FSC-SSC两个参数,可以把淋巴细胞圈出来。当然,如果用Ficoll分也没问题。

分析步骤如下:

  1. 画Dot Plot,横坐标FSC,纵坐标SSC。圈出淋巴细胞,设为R1。
  2. 画Dot Plot,横坐标CD4,纵坐标FSC,将Gate设为R1,圈出CD4、CD25双阳性的细胞,设为R2。
  3. 画Dot Plot,横坐标为CD25,纵坐标CD127,将Gate设为R1 AND R2,圈出CD25+CD127low细胞,即为Treg的比例。

2009年8月12日 0:54

看全部 | 倒序浏览

有 5 条回复

2楼 YGao LV2

Treg不是在CD127low的群体里吗,为什么最后Histogram直接画CD127阴性呢?

3楼 niwanmao 楼主

引用: YGao 发表于 2019-5-27 20:40
Treg不是在CD127low的群体里吗,为什么最后Histogram直接画CD127阴性呢?

年代如此久远的帖都被翻出来了
10年前还没做过Treg分析,所以回答比较粗糙,忽略了弱表达的群体,现已更改。