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[淋巴细胞相关] gMDSC和neutrophil如何区分

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发表于 2016-6-22 23:42:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
6流星
各位老师好,倪老师好,最近在做gMDSC,参照nature medicine的文章
分离PBMC(GE的PLUS淋巴分离液)后,用BD Fixable Viability Dye BV510,CD33-APC,HLA-DR-APC-H7,CD11b-PE-CY7,CD14-FITC,CD15-Percp-cy5.5
圈门策略一样
但是有多次,找的血常规正常的体检患者作为对照的gMDSC也比例相当高(>15%),和文献报道完全不一致,上流式的老师说是可能有neutrophil的干扰(SSC,FSC那张图里面靠右上方有一群比例不低,且这一群多为CD33+,CD11B+,HLA-DR-,CD15+)
想知道是我的健康人群选择的问题(并不健康),还是PBMC提取存在问题?(但是如果是PBMC分离导致的差异,岂不是这个细胞的比例和操作者吸取白膜层的操作关系很大?)
有没有区分gMDSC和Neutrophil的marker?
跪求,头疼了


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 楼主| 发表于 2016-6-22 23:42:42 | 显示全部楼层
附图是nature medicine发表的圈门策略
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发表于 2016-6-23 08:47:51 | 显示全部楼层
浏览了下你所说的这篇文章(http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html),病人是挺高的,而且变异很大。
从这个门看,所谓的gMDSC我觉得就是未成熟粒细胞的一部分,而外周血中正常情况下应该不会很高,所以,我建议你挑选的健康人还是应该仔细筛选过其它检验指标,单看血常规不能作为依据的。如果你觉得还是不放心,可以标记胞内的Arginase I(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4408163/),但是那样的话会增加标记难度,实验结果可能更能把握。
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 楼主| 发表于 2016-6-23 21:03:56 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-6-23 08:47
浏览了下你所说的这篇文章(http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html),病人是挺高的 ...

我也准备检测Arginase在各PBMC亚群的表达,但好像根据NM那篇文章,arginase在Neutrophils中间表达也很高,MFI值和gMDSC重叠
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 楼主| 发表于 2016-6-23 21:09:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-6-23 08:47
浏览了下你所说的这篇文章(http://www.nature.com/nm/journal/v21/n6/full/nm.3856.html),病人是挺高的 ...

为什么未成熟粒细胞会CD11b很高?根据粒细胞的成熟分化标记那张图,不是应该在成熟以后高表达么?再就是我做的CD11b和CD33的那个图和NM文献略有不同,如下图
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 楼主| 发表于 2016-6-23 21:11:18 | 显示全部楼层
本帖最后由 lxk47640 于 2016-6-23 21:12 编辑

我的CD33,CD11b图 不论病人健康人都有两个群(有的分开一点,有的连在一起但能区分出),CD33更高的一群,和略高的一群,略高的那一群是HLA-DR-,更高的那一群是HLA-DR+
未命名.JPG
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发表于 2016-6-23 21:50:56 | 显示全部楼层
lxk47640 发表于 2016-6-23 21:03
我也准备检测Arginase在各PBMC亚群的表达,但好像根据NM那篇文章,arginase在Neutrophils中间表达也很高 ...

我的意思是未成熟的CD11b不高,所以外周血的gMDSC比例会低。
从你的图片看,这分群应该挺好,不一定跟它们完全一样。
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发表于 2021-4-15 16:38:39 | 显示全部楼层
请问一下楼主,这个问题解决了没
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