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请教一下Blank组 同型对照 FMO 的相关问题
老师:
你好。想咨询以下几个问题:
1)在做荧光补偿时,理论上来说需要blank管以及各单色管。但是为什么我看有些调补偿,根本没有blank管,只有单色管,特别是对于临床上的多色分析,这是为什么呢?
2)很多流式仪能够自动调节补偿,但是如果发现在检测时某一通道的补偿未调好的话,应该怎么办呢,可以不可以举例说明一下呀?
3)多色补偿调节好后,应用补偿数据到样本,这时需要精确圈门需要做FMO,比如(-)+PE+cy5PE+cy7PE           (FITC的FMO对照),那我画图分析的时候应该怎么做呢?(突然很糊涂,画FITC分别与这三个荧光通道的图?然后我怎么确定FITC的阴阳性那根线啊,这样画了就有三根线了啊,confused..)

麻烦依依老师解答一下,感谢。
已参考http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&action=printable&tid=2221
http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=4404&highlight=%E5%90%8C%E5%9E%8B%E5%AF%B9%E7%85%A7

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1、临床上,一般都是利用患者体内残留的正常细胞作为内对照,所以能够很方便地确定哪些抗原阳性,哪些阴性,然后补偿应该怎么样。所以一般不太需要单色调补偿。
2、自动调节补偿,还是基于单色管,而单色管大多是采用一个抗原+不同荧光素,所以最后还是需要微调,微调的基本原则就是你所用样本的已知表达情况,所以就像临床上的内对照一样,必须要有一个已知表达的样本,你才能去微调。
3、既然是FMO,就根据FMO的边缘画线即可。
niwanmao 发表于 2017-7-6 08:04
1、临床上,一般都是利用患者体内残留的正常细胞作为内对照,所以能够很方便地确定哪些抗原阳性,哪些阴性 ...

老师你好,我想追问一下
1.临床上如果做多色,如果需要调补偿的话,我们是不是需要准备单色管和blank管;  还是说仅仅只需要单色管就可以调补偿?
2.一般情况下,临床上做多色是不是直接所有抗体加进去染,不需要跑空白对照?
3.我不太理解FMO那条线怎样画,FITC与PE, FITC与cy5PE,FITC与cy7PE共有三条线,那选哪条做为FITC的阴阳性的线呢?(初接触,请多多包涵)
lgfffancy 发表于 2017-7-6 15:02
老师你好,我想追问一下
1.临床上如果做多色,如果需要调补偿的话,我们是不是需要准备单色管和blank管; ...

1、我前面说过了,是利用标本内部正常细胞作为调节补偿的对照,可以直接几个标记一起染,当然,如果新手,当然是可以用你说的单色管。
2、是的。
3、你这个问题我还是没看懂,设FMO的门,就是沿着其边缘设一个就行了呀。
niwanmao 发表于 2017-7-6 19:26
1、我前面说过了,是利用标本内部正常细胞作为调节补偿的对照,可以直接几个标记一起染,当然,如果新手 ...

谢谢,老师对于第一个问题 临床上是不是可以直接多染调补偿,连正常细胞作对照也不需要?
lgfffancy 发表于 2017-7-8 16:35
谢谢,老师对于第一个问题 临床上是不是可以直接多染调补偿,连正常细胞作对照也不需要? ...

奇怪,我前面这个问题连续回答了两次了呀,是直接多色染色,用标本内残留的正常细胞调节补偿的对照
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