流式杂谈和进展

1.47 W niwanmao 管理组

在各种流式细胞术检测中,正确区分阳性和阴性十分重要。要实现阳性细胞群的良好区分,消除抗体的非特异性结合很重要,尤其是Fc受体非特异性结合抗体。

正因为如此,了解哪些细胞表面表达Fc受体就非常重要。Fc受体只表达在单核、巨噬细胞上面吗?我们来看一下下面这张表:

FcR.png  (2017-11-2 17:47 上传)

75.18 KB, 下载次数: 28



从这张表可见,Fc受体分为6个亚型,几乎涉及各类血细胞,单核、巨噬细胞勿庸质疑,郎罕氏细胞与他们有亲戚关系,也可以理解,中性粒细胞、NK细胞表面有CD16,也说的通,分万万没想到啊,血小板、B细胞、gdT细胞们,连你们这些细胞都有Fc受体啊。

所以筒子们,只要是非abT细胞的检测,都加上Fc阻断剂吧,可选阻断剂有:
(1)商品化的Fc Block(25ug/ml或10ug/ml);
(2)2.5%或10%的人血清或小鼠血清;
(3)100ug/ml的人IgG。

表格部分资料编译自Roitt’s Essential Immunology,第13版

看全部 | 倒序浏览

有 18 条回复

推荐 niwanmao 楼主

热心站友 张继全 在微信上的补充评论:

引用: 想做进一步说明如下:1,很多人及大鼠IgG亚型都可与小鼠Fc receptor有很好的结合,但小鼠IgG亚型对人Fc receptor的结合则差很多;2,因此,不论用什么种属的IgG染小鼠细胞,稳妥的办法是使用Fc block; 3, 也因此,染人细胞就不是太大的问题,可加可不加,很多专业文献也是不加。 以上是经验之谈(本人为小鼠immunology领域贡献了两个特异性细胞表面标记,Siglec-F for eosinophils and Siglec-H for plasmacytoid dendritic cells)

2楼 niwanmao 楼主

热心站友张继全在微信上的评论:
引用: B细胞产生抗体,当然需要Fc:受体FcgR2B, 借以对B细胞产生反馈抑制。对此不必大惊小怪。 小鼠染色推荐Fc block, 并不推荐血清。拍着脑袋想想,细胞早在体内已exposed to血液了,血清block没有多大意义。


热心站友孙大千在微信上的评论:
引用: 大赞援引美国同事的口号“Fc block, make your data rock!"只补充一句,阻断剂应该和样本同源。

4楼 fcm117 LV2

倪老师,您好!血液中提取NK细胞,培养后做流式,需要封闭Fc受体吗?

5楼 niwanmao 楼主

引用: fcm117 发表于 2018-4-25 15:16
倪老师,您好!血液中提取NK细胞,培养后做流式,需要封闭Fc受体吗?

最好封闭一下比较好。你们做什么抗体?

6楼 fcm117 LV2

引用: niwanmao 发表于 2018-4-25 17:31
最好封闭一下比较好。你们做什么抗体?

CD56和CD3.

7楼 yueliangchulail LV4

倪老师,您好!Fc阻断用胎牛血清可以吗?

8楼 niwanmao 楼主

引用: yueliangchulail 发表于 2018-10-19 17:10
倪老师,您好!Fc阻断用胎牛血清可以吗?

可以,但效果不如BSA,BSA又不如商品化的Fc Blocking。

9楼 yueliangchulail LV4

好的,Thanks♪(・ω・)ノ

10楼 心云慷慨812 LV2

请问如果要检测Fc,特别是和其他marker一起检测的话怎么办?(人的血清/组织免疫相关细胞样本)比如单核细胞,想看它Fc的表达,也想看功能表型。
加载更多