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楼主: ET生物人
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[淋巴细胞亚群] CAR-T或TCR-T表型检测

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发表于 2020-5-26 11:40:33 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞,方法很多,目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次,检测出 ...

谢谢倪老师
发表于 2020-5-26 11:43:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞,方法很多,目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次,检测出 ...

使用了荧光标记的靶抗原,还需要再加一个CD3吗?
发表于 2020-5-26 12:43:06 | 显示全部楼层
wjd850801 发表于 2020-5-26 11:43
使用了荧光标记的靶抗原,还需要再加一个CD3吗?

需要的。
发表于 2020-6-2 10:36:18 | 显示全部楼层
本帖最后由 120971944 于 2020-6-2 10:41 编辑

检测CAR(阳性率)真的不太好检测,因为CAR这个抗原受体,每个公司的CAR-T产品的CAR是不一样的,与之完全对应的检测抗体根本就没有啊,这不像细胞本身就存在的抗原如CD3什么的很多试剂公司的产品都能用,检测结果差不多。
CART的就不行了,用过几家的,都检测不出来。
是CAR+阳性率检测确实是一个难题,大多采用荧光二抗来检测,操作麻烦,灵敏度不高,特异性不好,分群不明显。
发表于 2020-6-3 09:51:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞,方法很多,目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次,检测出 ...

请教既然有荧光素的抗原,为什么还要绝对计数?
发表于 2020-6-3 14:11:05 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2020-6-3 09:51
请教既然有荧光素的抗原,为什么还要绝对计数?

抗原结合CAR,是为了检测出CAR-T细胞。
只有检测出CAR-T细胞,再进行绝对计数计算,这是为了确定细胞数量。
发表于 2020-6-3 14:41:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-6-3 14:11
抗原结合CAR,是为了检测出CAR-T细胞。
只有检测出CAR-T细胞,再进行绝对计数计算,这是为了确定细胞数量 ...

所以是目前正常检测CAT-T细胞,都是希望能够明确到绝对数量的啊?是因为CAR-T占比太少吗?
另外确认下靶抗原的定义,例如CAR是anti-CD20,那么靶抗原是标记了荧光素的CD20蛋白?
120971944战友提到的荧光二抗是指anti-CD20的二抗,即针对FC端的anti-IgG吗?
发表于 2020-6-3 22:12:44 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2020-6-3 14:41
所以是目前正常检测CAT-T细胞,都是希望能够明确到绝对数量的啊?是因为CAR-T占比太少吗?
另外确认下靶 ...

生产CAR-T会有需要计算绝对数,因为要回输,需要计算回输数量。
总细胞数*比例也可以,但是属于双平台计数,相对单平台计数稍逊一筹。

靶抗原的理解是对的,CAR-T的检测方案有多种,详见前段时间编译的综述:https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8479-1-1.html
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