一个细胞周期结果出来,如果已经知道样本是2倍体,很简单,用Modfit等专业软件,一拟合,马上就出来了:
Fig1.png
(2018-8-1 11:34 上传)
5.49 KB, 下载次数: 4
但如果样本的倍体未知呢?苦恼了。
没关系,两个绝招。
1、用鸡红细胞核
我们会发现,很多标准的Protocol里面,都会提到用鸡红细胞做倍体参照,其实就是鸡红细胞核(CEN)。CEN的DNA含量大约是人的35%,这就意味着人的细胞DNA指数是1.0,CEN的DNA指数是0.35。因此,可以用CEN峰的位置,就能确定未知样品的相对DNA指数。
Fig2.png
(2018-8-1 11:34 上传)
6.07 KB, 下载次数: 4
另外,也可以用鳟鱼红细胞核(TEN),但TEN的DNA含量是人的80%,就是DNA指数0.8,所以TEN的G2/M峰可能会与人细胞的S期重叠,使得细胞周期分析困难。 因此,大多数情况下,还是会用CEN,不会对样本的直接分析产生干扰。
2、用已知倍体的样本
如果你有已知的倍体,也是可以用于做参照的。例如有一份已知二倍体的细胞,上机后得到2C和4C两个峰,再上一个未知样本,发现其两个峰分别是4C和8C的位置,那么就可以确定该样本是四倍体。但分析的时候,不能像用CEN那样直接采用混合样本,因为已知倍体的样本会对分析产生干扰。所以个人建议需要设置两管:
(1)已知倍体+未知倍体,确定倍体类型
(2)未知倍体,分析倍体和周期分布
Fig3.jpg
(2018-8-1 11:35 上传)
27.77 KB, 下载次数: 3
参考:Vindeløv, L.L., Christensen, I. J., Nissen, N. I. (1983) Standardisation of high-resolution flow cytometric DNA analysis by the simultaneous use of chicken and rout red blood cells as internal reference standards. Cytometry 3, 328-331.