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1733 niwanmao 管理组

尽管之前发过不少关于Fc阻断重要性的帖子(流式中文网论坛搜索“阻断”即可),内容基本上都讲的比较清楚了。但是人嘛,还是想越简洁越好。

下面这张图转自fccf.mskcc.org,虽然也有较多文字,但相对简单明了的排版比较适合快速了解。
简单概括一下:
Fab端结合抗原,用于检测的,但由于抗体是Y形的,所以还有个Fc端,会与细胞表面的Fc受体发生非特异性染色,导致假阳性。
非特异性染色的细胞很多,包括B细胞、DC、单核、巨噬、NK、中性粒、嗜酸粒、血小板、肥大、嗜碱等细胞。
Fc Blocking就是为了避免这种情况的。
Fc阻断剂的种类这幅图里面介绍的不够详细,一般证实以下三种比较好(主要是针对人或小鼠的样本,其它物种需要对应的种属):
(1)商品化的Fc Block(25ug/ml或10ug/ml);
(2)2.5%或10%的人血清或小鼠血清;
(3)100ug/ml的人IgG。

Fc.jpeg  (2020-2-25 15:58 上传)

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有 5 条回复

2楼 毛豆24821 LV4

有个问题,细胞是猴子PBMC,使用的Human FC block中是包括了Human IgG的,现在很多一抗是全人源化的抗体,所以如果二抗是anti-human IgG Fc,那这时候应该用什么来block。猴血清跟anti-human IgG Fc也会有结合的。
或者这种情况可以不做Block吗?

3楼 毛豆24821 LV4

有个问题,细胞是猴PBMC,使用的Human Fc block中包含了Human IgG,现在很多一抗是全人源化的抗体,接着用荧光标记anti-human IgG Fc作为二抗。 这种时候二抗会与Fc block结合,产生假阳性。
请问这种时候应该选择什么来作为block,另外猴血清也会与二抗有结合。或者这种情况是否可以不做block?

4楼 毛豆24821 LV4

有个问题,细胞是猴PBMC,使用的Human Fc block中包含了Human IgG,现在很多一抗是全人源化的抗体,接着用荧光标记anti-human IgG Fc作为二抗。 这种时候二抗会与Fc block结合,产生假阳性。
请问这种时候应该选择什么来作为block,另外猴血清也会与二抗有结合。或者这种情况是否可以不做block?

5楼 jnutsq LV2

倪老师,2.5%和10%,请问为什么差别很大。我是做人的全血。谢谢!

6楼 jnutsq LV2

倪老师,请问应该是用2.5%还是10%的浓度呢?每个加多少μL呢?人的全血样本。谢谢!