当CFSE测细胞增殖出现单峰左移，不要怀疑自己

niwanmao · 发表于 2020-9-24 16:13:23

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我们的老站友，浙江大学邵逸夫医院沈筱芸老师，昨天给我发来一段微信，希望分享一段关于CFSE染色的经验，让各位研究生能够少走些弯路，顺利做完实验，在此表示非常感谢。
这段经验其实很简单，CFSE我们通常希望能够跑出漂亮的多峰图形，父代 ~ 子代，一代代的都分隔清楚（参见https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2370-1-1.html），但是不少FLOWER做的都是肿瘤细胞，结果同样CFSE染色，愣是跑不出多峰图，做到最后，让人怀疑人生。

按照沈筱芸老师的经验，她们做了很多肿瘤细胞，都是如此，最后发现有文献研究了此现象的机制，怀疑与肿瘤细胞主动外排染料导致：

从文献中的图看，虽然没有形成多峰，但是CFSE荧光强度还是能与分裂代数形成一定的线性关系：

相关文献及其附件附于此，在做肿瘤细胞CFSE增殖实验的FLOWER们可下载参考：

细胞增殖实验.pdf (648.37 KB, 下载次数: 256)

cytoa23105-sup-0002-suppinfo2.doc (120.5 KB, 下载次数: 105)

cytoa23105-sup-0001-suppinfo1.docx (2.48 MB, 下载次数: 103)

这种实战经验，相信是各位FLOWER最需要的，所以期待所有热心FLOWER都能像沈老师那样，乐于分享，帮助世界上正在做流式的其它人。

tiger · 发表于 2020-10-13 16:53:24

niwanmao 发表于 2020-10-13 08:02
目前只是发现了这个现象，机制尚不明确。
有兴趣的话可以深入研究一下。 ...

T淋巴细胞具有干细胞特性，在激活状态并在生长因子的作用下可分裂增殖，但每一代都会有一部分细胞处于G0期，所以在染了CFSE后会出现连续的几个峰。而肿瘤细胞G0期很少或没有，所有的细胞都分裂增殖了，不论在那个时间点测试，都只有一个左移峰。不知是不是这个道理。

侯效林 · 发表于 2020-9-24 17:01:55

感谢沈筱芸老师和倪老师，正是你们的经验分享使我们少走了很多弯路，再次感谢！

niwanmao · 发表于 2023-7-16 20:08:45

Dr-zhang 发表于 2023-7-15 17:56
老师，您好，当CFSE标记肿瘤细胞测增殖出现单峰左移的话，应该如何分析数据和展示结果呢？ ...

用MFI来代表数据结果。

Dr-zhang · 发表于 2023-7-15 17:56:42

老师，您好，当CFSE标记肿瘤细胞测增殖出现单峰左移的话，应该如何分析数据和展示结果呢？

奋斗的ida · 发表于 2023-6-26 22:02:14

niwanmao 发表于 2020-10-11 20:29
不好意思，我前面说错了，是均分到子代。只是因为用LOG坐标，所以看不出类似周期那样减半的分布，但是代 ...

那请教下倪老师，我做人的外周血B细胞，加了刺激剂，干预了5天，也是单峰左移，试了好几个人外周血，会不会也是这个原因。谢谢倪老师。

niwanmao · 发表于 2023-3-16 14:44:35

结气期发表于 2023-3-16 12:15
倪老师，我最近也在做癌细胞的增殖，分了（0，12，24，48，64，72）h 几组去检测，本来以为总有一组能出现 ...

典型的多峰，一般都是淋巴细胞做出来的。不同细胞增殖峰应该会有不同。

搭建这个网站的目的，就是为了让大家互通有无，网聚流式人的力量，总会能帮到需要的FLOWER的。

结气期 · 发表于 2023-3-16 12:15:57

倪老师，我最近也在做癌细胞的增殖，分了（0，12，24，48，64，72）h 几组去检测，本来以为总有一组能出现那种多峰图，结果出现的都是单峰图。然后以为是细胞类型的原因，换了细胞还是这样，然后查文献说可能是CFSE浓度太高对细胞分裂能力有影响，所以我又按不同倍数去稀释标记细胞不同时间去检测结果还是单峰，用软件拟合最多只有两个峰，第二个峰还特别的矮。前期后后做了7、8次已是身心俱疲。今天看到这个贴子，我热泪盈眶，在此感谢浙江大学邵逸夫医院沈筱芸老师，感谢倪老师，感谢这个网站，感谢大家的无私分享。

lsm · 发表于 2021-12-27 21:49:48

如上图单峰左移用flowjo分析出平均荧光强度之后要怎么计算出mean division number 直接拿0h的平均荧光强度除以24h的平均荧光强度吗还是有其他的计算方式希望赐教

LF1997 · 发表于 2021-11-22 14:21:15

都是用1mlpbs悬细胞，加同样量的cfse，细胞量根据实验需要会有所改变

LF1997 · 发表于 2021-11-22 14:19:46

niwanmao 发表于 2021-9-3 22:05
细胞密度和CFSE用量都一致吗？

cfse的用量是不变的，细胞密度会变，因为每次接板子的数目不一样

niwanmao · 发表于 2021-9-3 22:05:37

LF1997 发表于 2021-9-3 08:43
谢谢老师答疑，最近做cfse有个疑惑，不同批次的0d总会有一定的差异，导致后面的数据也会有一定的浮动，请 ...

细胞密度和CFSE用量都一致吗？

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