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niwanmao 看全部
2020-9-24 16:13:23
流式中文网一直以来,是流式爱好者的网上家园,我们不为名、不为利,只为一个干净、纯粹的技术交流场所。正是如此,精彩的内容时不时会出现。
我们的老站友,浙江大学邵逸夫医院沈筱芸老师,昨天给我发来一段微信,希望分享一段关于CFSE染色的经验,让各位研究生能够少走些弯路,顺利做完实验,在此表示非常感谢。
这段经验其实很简单,CFSE我们通常希望能够跑出漂亮的多峰图形,父代 ~ 子代,一代代的都分隔清楚(参见https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2370-1-1.html),但是不少FLOWER做的都是肿瘤细胞,结果同样CFSE染色,愣是跑不出多峰图,做到最后,让人怀疑人生。

按照沈筱芸老师的经验,她们做了很多肿瘤细胞,都是如此,最后发现有文献研究了此现象的机制,怀疑与肿瘤细胞主动外排染料导致:
20200923_160031.jpg (88.97 KB)
(下载次数: 1, 2020-9-24 15:58 上传)
20200923_160041.jpg (59.88 KB)
(下载次数: 1, 2020-9-24 15:58 上传)



从文献中的图看,虽然没有形成多峰,但是CFSE荧光强度还是能与分裂代数形成一定的线性关系:
20200923_165502.jpg (284.55 KB)
(下载次数: 0, 2020-9-24 15:58 上传)



相关文献及其附件附于此,在做肿瘤细胞CFSE增殖实验的FLOWER们可下载参考:
细胞增殖实验.pdf (648.37 KB)
(下载次数: 145, 2020-9-24 16:09 上传)
cytoa23105-sup-0002-suppinfo2.doc (120.5 KB)
(下载次数: 55, 2020-9-24 16:09 上传)
cytoa23105-sup-0001-suppinfo1.docx (2.48 MB)
(下载次数: 47, 2020-9-24 16:09 上传)



这种实战经验,相信是各位FLOWER最需要的,所以期待所有热心FLOWER都能像沈老师那样,乐于分享,帮助世界上正在做流式的其它人。
tiger 看全部
2020-10-13 16:53:24

引用:

niwanmao 发表于 2020-10-13 08:02
目前只是发现了这个现象,机制尚不明确。
有兴趣的话可以深入研究一下。 ...

T淋巴细胞具有干细胞特性,在激活状态并在生长因子的作用下可分裂增殖,但每一代都会有一部分细胞处于G0期,所以在染了CFSE后会出现连续的几个峰。而肿瘤细胞G0期很少或没有,所有的细胞都分裂增殖了,不论在那个时间点测试,都只有一个左移峰。不知是不是这个道理。
侯效林 看全部
2020-9-24 17:01:55
感谢沈筱芸老师和倪老师,正是你们的经验分享使我们少走了很多弯路,再次感谢!
南瓜妹妹 看全部
2020-9-26 10:58:09
很好的实验经验分享,谢谢各位老师的分享!
qyj2017 看全部
2020-10-1 17:02:39
很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗
niwanmao 看全部
2020-10-1 19:22:34

引用:

qyj2017 发表于 2020-10-1 17:02
很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗

Modfit软件里面,有标准的程序化自动拟合。
btx362237729 看全部
2020-10-9 14:31:36
感谢分享
Veblen 看全部
2020-10-9 22:35:13
老师,您好coculture那个图没太看懂,是指细胞从母代开始同步增殖对吧,既然同步增殖,在某个时间点就应该只有某一代的细胞,那为什么我看DAY2 DAY3 DAY4里面怎么会有好几个峰呢?同时这几个峰荧光强度还不呈现2倍关系。请老师讲解一下怎么看图哈,谢谢
niwanmao 看全部
2020-10-10 10:23:40

引用:

Veblen 发表于 2020-10-9 22:35
老师,您好coculture那个图没太看懂,是指细胞从母代开始同步增殖对吧,既然同步增殖,在某个时间点就应该 ...

不同的细胞系,增殖速度会不同,而且同一时间点,可能有一代,也可能两代。荧光强度不是2倍,不能用细胞周期的思维来推,因为CFSE并不是对半分的。
Veblen 看全部
2020-10-11 17:36:24

引用:

niwanmao 发表于 2020-10-10 10:23
不同的细胞系,增殖速度会不同,而且同一时间点,可能有一代,也可能两代。荧光强度不是2倍,不能用细胞 ...

那我可不可以这样理解,基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰?
niwanmao 看全部
2020-10-11 20:29:50

引用:

Veblen 发表于 2020-10-11 17:36
那我可不可以这样理解,基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰? ...

不好意思,我前面说错了,是均分到子代。只是因为用LOG坐标,所以看不出类似周期那样减半的分布,但是代数之间能够分开。只是在淋巴细胞上面由于父代存在时间长,所以各代之间分隔比较明显。而前面这些肿瘤细胞系,却分裂速度快,所以父代很快就没,大家几乎同步进入下一代,所以形成逐步左移的现象。
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