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小心花青素串联染料,未阻断到位,很可能导致假阳性

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-12-4 14:41| 查看数: 160| 评论数: 3|帖子模式

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最近,Kristensen MW等人发现了一个有趣的现象,即来自健康供体的外周血单个核细胞(PBMC),特别是单核细胞,对巨噬细胞甘露糖受体(CD206)的染色呈弱阳性。 这些实验是使用小鼠抗人CD206 PE-Cy7抗体(BioLegend,克隆号15-2)进行的。 但是,现有文献中已经明确单核细胞不表达CD206。 于是作者进一步研究了该现象背后的原因。

滴定实验的初步结果引起了他们的关注,下图A排除碎片、死细胞、粘连体之后,图B分析15-2克隆号的CD206 PE-cy7抗体在各系的表达,发现单核细胞衍生的巨噬细胞(MDM)的CD206染色阳性(符合预期),而单核细胞也出现弱阳性(不符合预期)(下图的A + B)。 更有意思的是,当使用相同克隆但结合了APC荧光素的抗CD206克隆,在来自相同供体的PBMC上重复实验时,结果显示CD206在MDM上表达,但在PBMC上不表达(下图C)。 使用另一个克隆(抗CD206 PE,克隆号19-2,BD Biosciences)进行的另一个实验的数据也显示CD206在MDM上表达,但在PBMC上不表达(下图的D)。
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实验探索到此,作者开始怀疑与PE-Cy7偶联的抗CD206抗体的非特异性抗体结合,可能不能被人IgG(100 µg/mL)的Fc受体阻断所去除。 不过为了排除是否是由抗体聚集引起的,作者在使用前再次离心了一下206 PE-Cy7抗体(5000xg 5分钟),但并不能减轻单核细胞的CD206假阳性。

因此,作者强烈怀疑PE-Cy7荧光染料是造成此问题的原因。于是他们又做了19次鼠IgG1同型对照,结果发现所有显示出与单核细胞明显非特异性结合的都是PE-花青素串联染料(特别是PE-Cy5和PE-Cy7),而其他几个IgG1同种型对照显示有限或没有非特异性结合,例如PerCP-Cy5.5,AlexaFluor 647(AF647)和BV510和一个PC5。
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最新评论

damaiyawo 发表于 2020-12-4 15:31:44
PE CY5 和PC5是不是一个东西啊?求解??
niwanmao 发表于 2020-12-6 11:11:23
damaiyawo 发表于 2020-12-4 15:31
PE CY5 和PC5是不是一个东西啊?求解??

这两个是一样的。但是如果按照FCS3.2的标准要求,目前PE-cy5已经是简称了,所以PC5这个词在FCS3.2格式的文件里面尽量不要用。
gladys121 发表于 2020-12-8 11:06:58
这个磷酸化的寡核苷酸是可以自己合成吗?看了文章有点没明白
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