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一步一步教你做细胞周期实验

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-2-23 10:42| 查看数: 165| 评论数: 8|帖子模式

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本视频搬运自https://www.youtube.com/watch?v=RbisI3fws_g,中文字幕为机器翻译自动生成,其中不少低级错误,请忽略之。英文字幕也是自动生成,但相对错误较少,可作为理解上的参考。如果听力没问题的FLOWER,可完全忽略字幕。 这段视频,从细胞周期的概念、原理开始讲,然后到实际操作的一步步演示,尤其中间那段「边振荡边加入乙醇」的操作,相信给无法理解这个操作的FLOWER一个非常直观的印象。 视频见下:

最新评论

lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14:54
倪老师,这个视频操作讲的比较详细了,但是实验步骤,尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min,是不是跟我之前做的4℃(2h-过夜)差异比较大啊。@niwanmao
niwanmao 发表于 2021-2-24 08:55:06
lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14
倪老师,这个视频操作讲的比较详细了,但是实验步骤,尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min,是不是跟 ...

这个15分钟,如果操作得当,也是染的出来的,乙醇的破膜能力还是不错的。但是保险起见,4度24小时,当然最好。
tiger 发表于 2021-2-24 15:51:47
lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14
倪老师,这个视频操作讲的比较详细了,但是实验步骤,尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min,是不是跟 ...

这个视频应该是多年以前的了,操作太复杂。在周期分析中,乙醇的作用不仅是破膜,更重要的作用是把DNA从组蛋白中沉淀出来,以便PI充分嵌入。
niwanmao 发表于 2021-2-25 13:07:59
tiger 发表于 2021-2-24 15:51
这个视频应该是多年以前的了,操作太复杂。在周期分析中,乙醇的作用不仅是破膜,更重要的作用是把DNA从组 ...

感谢您的补充。

视频我看上面的发布日期是2020年10月份的。
乙醇对提取出来的核酸是有沉淀作用,不过我个人的理解是,乙醇作用在完整细胞上,应该主要是破膜和「蛋白质变性使核酸染料易于结合DNA双螺旋结构」。
刚刚刚 发表于 2021-2-25 18:21:11
乙醇处理之后会有很多像絮状物类似的东西贴在管壁上,按1500rpm*5min,依然离心不下去。这时候用枪去吸走上清,会把一部分这个东西吸走,这一部分是DNA吗?弃走对后续染色的结果影响大不大呀?
tiger 发表于 2021-2-26 16:37:19
刚刚刚 发表于 2021-2-25 18:21
乙醇处理之后会有很多像絮状物类似的东西贴在管壁上,按1500rpm*5min,依然离心不下去。这时候用枪去吸走上 ...

给你提个建议:固定细胞可以这样操作,先0.3ml PBS悬浮细胞,把悬浮好的细胞用移液器加到0.7ml 无水乙醇中,快速混合,置-20过夜。取出离心弃酒精前,先混匀。

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刚刚刚 发表于 2021-2-27 21:46:36
tiger 发表于 2021-2-26 16:37
给你提个建议:固定细胞可以这样操作,先0.3ml PBS悬浮细胞,把悬浮好的细胞用移液器加到0.7ml 无水乙醇 ...

多谢!!
lulixian669 发表于 2021-2-28 22:28:06
niwanmao 发表于 2021-2-24 08:55
这个15分钟,如果操作得当,也是染的出来的,乙醇的破膜能力还是不错的。但是保险起见,4度24小时,当然 ...

谢倪老师,因为之前做的时候都是用的隔夜,效果挺好,就是想着能节约时间,看来还是保证效果优先。
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