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如何设门分析小鼠的B细胞亚群和T细胞亚群及其活化

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-2-25 14:37| 查看数: 333| 评论数: 3|帖子模式

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这是一个19参数的18色流式方案,经过设计和优化,能够对小鼠淋巴组织中不同的T细胞和B细胞亚群进行全面和同步的免疫表型鉴定。
使用该方案识别的细胞群包括4个主要的B细胞亚群(记忆、活化、浆细胞和浆母细胞)和7个主要的CD4+T细胞亚群(初始、中央记忆、效应记忆、辅助细胞、调节T细胞、滤泡辅助细胞和滤泡调节细胞)。


下图是对出生21天的新生BALB/c小鼠的新鲜分离的脾细胞染色结果,大家主要是要学习一下其设门步骤,不一定要做18色,主要是选择关键的设门标记,和关键的设门方式。

去碎片、去粘连体、圈活细胞,通过TCRβ和CD4/CD19,圈出TCRβ+CD4+的辅助T、TCRβ-CD19+的B细胞、TCRβ-CD19-部分(含浆细胞)。
2021-02-25_14-09-24.jpg

对TCRβ-CD19-进一步分析synd-1和IgM,圈出synd-1+ IgM+ I-A/I-E- 的浆细胞:
2021-02-25_14-10-18.jpg


对TCRβ-CD19+的B细胞,分析synd-1+ IgM+ I-A/I-E +的浆母细胞,对synd1-部分,进一步如下图逐级分析活化B、记忆B:
2021-02-25_14-12-20.jpg


对TCRβ+CD4+的辅助T细胞:
- 通过CD44和CD62L,分析TEM、TCM、Naive T;
- 通过CD25/foxP3分析Treg和效应T细胞;
- 通过CXCR5、ICOS、PD-1分析三阳性的Tfh
- 对Tfh进一步分析,圈出其中CD25和foxP3双阳的Tfr。
2021-02-25_14-13-24.jpg

Kyle T. Mincham, et al. High-Dimensional Immunophenotyping of Murine T-cell and B-cell Subsets. bioRxiv 2020.05.07.082214; doi: https://doi.org/10.1101/2020.05.07.082214

最新评论

xiaoflow 发表于 2021-2-28 15:51:13
感谢分享。
我很好奇作者为何使用TCRβ+而非CD3?在我所看到的文献中,CD3更加常见。思考了一下可能有以下原因:1.分选时使用TCRβ+,后续如果需要进行刺激仍可以使用CD3抗体;2.抗体种类和对应荧光染料的限制。
不知是我看的文献太局限了,还是有专门的原因呢。
niwanmao 发表于 2021-2-28 19:46:44
xiaoflow 发表于 2021-2-28 15:51
感谢分享。
我很好奇作者为何使用TCRβ+而非CD3?在我所看到的文献中,CD3更加常见。思考了一下可能有以下 ...

更主要的其实是,这里分析的这几类,都是非γδT,所以直接用TCRβ,免去CD3搭配TCRγδ排除γδT的麻烦,反而节省一个通道。
xiaoflow 发表于 2021-2-28 20:47:30
niwanmao 发表于 2021-2-28 19:46
更主要的其实是,这里分析的这几类,都是非γδT,所以直接用TCRβ,免去CD3搭配TCRγδ排除γδT的麻烦 ...

学习了,谢谢您
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