这是一个19参数的18色流式方案,经过设计和优化,能够对小鼠淋巴组织中不同的T细胞和B细胞亚群进行全面和同步的免疫表型鉴定。
使用该方案识别的细胞群包括4个主要的B细胞亚群(记忆、活化、浆细胞和浆母细胞)和7个主要的CD4+T细胞亚群(初始、中央记忆、效应记忆、辅助细胞、调节T细胞、滤泡辅助细胞和滤泡调节细胞)。
下图是对出生21天的新生BALB/c小鼠的新鲜分离的脾细胞染色结果,大家主要是要学习一下其设门步骤,不一定要做18色,主要是选择关键的设门标记,和关键的设门方式。
去碎片、去粘连体、圈活细胞,通过TCRβ和CD4/CD19,圈出TCRβ+CD4+的辅助T、TCRβ-CD19+的B细胞、TCRβ-CD19-部分(含浆细胞)。
对TCRβ-CD19-进一步分析synd-1和IgM,圈出synd-1+ IgM+ I-A/I-E- 的浆细胞:
对TCRβ-CD19+的B细胞,分析synd-1+ IgM+ I-A/I-E +的浆母细胞,对synd1-部分,进一步如下图逐级分析活化B、记忆B:
对TCRβ+CD4+的辅助T细胞:
- 通过CD44和CD62L,分析TEM、TCM、Naive T;
- 通过CD25/foxP3分析Treg和效应T细胞;
- 通过CXCR5、ICOS、PD-1分析三阳性的Tfh
- 对Tfh进一步分析,圈出其中CD25和foxP3双阳的Tfr。
Kyle T. Mincham, et al. High-Dimensional Immunophenotyping of Murine T-cell and B-cell Subsets. bioRxiv 2020.05.07.082214; doi:
https://doi.org/10.1101/2020.05.07.082214