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CD69、CD25、CD38、HLA-DR这四个细胞活化标记的意义和区别?

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发表于 2021-4-7 15:45:06 | 显示全部楼层 |阅读模式

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我们在此结合两篇文献(见附录参考文献),编译整理分享一下。

先看表:
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再看详细解释:
HLA-DR是人类II类主要组织相容性复合物(MHC)抗原,在B淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞的表面组成性表达,并参与抗原向CD4 + T细胞的呈递。大多数T细胞不表达HLA-DR,只有在免疫应答时T细胞活化的晚期,一部分活化T细胞可表达HLA-DR。 T细胞HLA-DR上调的原因及其后果尚未充分研究清楚,但有明确证据表明该现象是HIV疾病进展的标志。

CD38由初始T细胞组成性表达,在静息记忆细胞中下调,然后在活化细胞中再次升高。

HLA‐DR和CD38表达的这些特征表明,要对T细胞活化进行精确分析,需要多色流式细胞仪(例如6种以上的颜色)。对于HLA‐DR的研究,必须在染色方案中包括T细胞标志物(因为CD4+和CD8+T细胞之间HLA‐DR的预后意义不同),APC的标志物可以用作排除APC用。对于CD38的研究,方案中必须纳入初始和记忆性T细胞亚群的标志物,这对于区分那些由于T细胞活化而表达CD38还是初始T本身表达 是必需的。值得注意的是,单个细胞上CD38表达的密度也具有参考意义,尽管此类定量检测需要做荧光强度和绝对分子数之间的标准曲线,以便从荧光强度反推计算得出表达的分子数量。

细胞表面糖蛋白CD69是T细胞活化的另一个标记,这一点已得到广泛研究。它在静止的淋巴细胞中以非常低的基础水平表达,一旦被植物血凝素激活(通过TCR激活的促分裂原)激活,其表达会在3到12小时之间呈时间依赖性地增加,直至24小时一直升高,此后下降。这些研究表明,CD69是T细胞活化后上调的**最早标志物之一**,CD69表达的早期动力学和广泛分布使其成为在体外刺激试验中鉴定抗原反应性T细胞并有效纯化这些细胞的理想方法。但是,由于它会随细胞增殖而稀释,因此不能用于长期刺激试验。此外,当直接进行体外研究而不进行体外再刺激时,用CD69评估T细胞活化可能严重低估了体内活化T细胞的比例。

最后,细胞增殖的标志物可以用作T细胞活化的替代标记(因为增殖需要活化)。实际上,Ki-67的检测与HIV +个体中HLA-DR、CD38和CD69的表达是相关的。与其他活化标记相比,Ki‐67具有一个重要优势:它提供了T细胞更新的检测指标。具体而言,由于CD4 + T细胞的丢失是在慢性HIV感染后的数年内逐渐发生的,因此在短时间(即几天或几周)内T细胞的水平相对恒定。在这段时间内,增殖细胞的比例基本上反映了被破坏细胞的比例(即稳态动力学),因此高水平的Ki-67表达反映了HIV疾病中T细胞的快速破坏或更替。但是,由于Ki-67是一种核抗原,因此只能在固定和破膜后才能进行检测。因此,不能纯化存活的增殖细胞用于进一步分析。在这方面,与细胞增殖相关的其他细胞表面分子的测量可以作为备选(例如CD71转铁蛋白受体)。

CD25是IL-2受体的α链,在外周血淋巴细胞的几个亚群表面呈组成性表达,例如调节性和静息记忆T细胞。 在刺激TCR/CD3复合物的24小时内上调,并在几天内保持升高,CD25在对IL-2的反应性中起关键作用,可使得T淋巴细胞活化并进一步产生IL-2。 单核细胞和巨噬细胞释放的一些细胞因子以及其他触发T细胞活化的物质(例如氧化的LDL)能够诱导CD25表达。

所以,在活化顺序上,从早到晚应该是CD69、CD25、HLA-DR,而CD38的时间点,上述两篇文献中未找到数据。

参考文献:
- Chattopadhyay, P.K. and Roederer, M. (2010), Good cell, bad cell: Flow cytometry reveals T‐cell subsets important in HIV disease. Cytometry, 77A: 614-622. https://doi.org/10.1002/cyto.a.20905
- Anna Bajnok, Maria Ivanova, János Rigó, et al. The Distribution of Activation Markers and Selectins on Peripheral T Lymphocytes in Preeclampsia, Mediators of Inflammation, vol. 2017, Article ID 8045161, 7 pages, 2017. https://doi.org/10.1155/2017/8045161

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发表于 2022-5-10 09:00:19 | 显示全部楼层
CD69,为什么我三色FMO结果是90%,而十色FMO结果是40%呢。换了几次实验方案,只要在三色里48h-272h里都是达到80%。更换了CD69抗体还是两者差别很大。问题出在哪里呢。CD3                FITC
CD25                PE
CD69                APC
               
               
CD45                APC-CY7
CD3                BV510
CD4                Percp-Cy5.5
CD8                FITC
CD25                PE
CD69                PE-Cy7
CD14                BV605
CD19                BV421
CD56                APC
live                APC-R700
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 楼主| 发表于 2022-5-10 18:18:00 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2022-5-10 09:00
CD69,为什么我三色FMO结果是90%,而十色FMO结果是40%呢。换了几次实验方案,只要在三色里48h-272h里都是达 ...

这个问题我没看懂,你指的是哪两个通道?
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发表于 2022-5-10 21:49:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-5-10 18:18
这个问题我没看懂,你指的是哪两个通道?

就是对比实验,CD69两个数据没法评价。活化48h后,三色方案3.25.69的CD69结果是90%,十色方案的CD69结果是40%。
1.理论上48h以后CD69应该很低才对,三色方案里做了几次都是70%以上。
2.十色方案数据看似正常可是比简单的3.25.69三色方案差一倍。
3.上边写的是通道,三色和十色的。
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 楼主| 发表于 2022-5-11 18:05:19 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2022-5-10 21:49
就是对比实验,CD69两个数据没法评价。活化48h后,三色方案3.25.69的CD69结果是90%,十色方案的CD69结果 ...

10色的CD69,受到邻近的CD4、CD25、live/dead通道的影响,尤其是live/dead应该影响比较大,所以你得检查一下补偿。如果因为补偿过度导致比例低,并且无法调回来,那么建议还是需要用3色评估活化。
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发表于 2022-8-5 10:37:05 | 显示全部楼层
老师,请问cd69和cd25是不是要刺激后才能检测到,直接检测是不是表达量会很低。
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 楼主| 发表于 2022-8-5 13:32:52 | 显示全部楼层
cczxgysl 发表于 2022-8-5 10:37
老师,请问cd69和cd25是不是要刺激后才能检测到,直接检测是不是表达量会很低。 ...

刺激后,可以看刺激活化的效果。
直接测也会有一些,但不高。
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