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niwanmao 看全部
2021-9-14 11:16:33
MBC=Memory B Cells,记忆B细胞

MBC的概念
过去,MBC的概念可能存在一定的错误。 例如,在小鼠和人类中,很长一段时间内,MBC 被认为具有转换(非IgM)同种型,认为MBC 会携带 V 区突变,并且比它们对应的 NBC(Naive B Cells)具有更高的亲和力,MBC本身必须响应更快。

以上这些都是记忆响应的独特属性,但不一定是每个MBC都会具备的。

MBC的不可知定义
MBC可能从功能上定义会更可取:一个细胞遇到抗原并对其作出反应,并在给定的时间点能够返回到静止状态,持续存在于动物体内。该细胞还应保持对抗原的第二次攻击的响应。这个定义排除了将「不分裂的浆细胞」视为MBC的可能性。因此,以前所说的「记忆浆细胞」应只能命名为浆细胞。根据这个定义,可以在免疫后的任何时间间隔内发现和研究MBC。

MBCs 是如何在小鼠中产生和定义的
根据前述MBC的这个新定义,在小鼠中更容易实现和发现。 可在小鼠中进行细胞回输实验和染料稀释研究,就能发现数周后唯一残留的B细胞正是那些响应抗原而分裂的细胞 ,使用BrdU 标记来标记免疫后分裂的细胞,然后使用标记的抗原或其他替代标志物确定「抗原特异性B细胞」。

下面是用于生成小鼠MBC的过继输注方法。 B1-8i+/- 基因靶向 BALB/cJ 小鼠携带种系编码的、未突变的 Vh186.2 定点转基因,当与 λ1 轻链配对时,编码对半抗原硝基苯基 (NP) 具有中等亲和力的 BCR。为了产生 MBC,将来自 B1-8i+/− 基因靶向 BALB/cJ 小鼠的 2×10E5 个初始、NP反应性B细胞过继转移到 AM14 转基因 × Vk8R(AM14 Tg Vk8R KI)BALB/cJ 小鼠中。 流式图均基于单个活细胞,设门旁的数字代表门内细胞的比例。 (a)回输初始B,且经过NP-CGG免疫的小鼠,八周后的脾脏组织可在流式上发现明显的NP反应性MBC(横坐标为CD19,纵坐标为荧光标记的NP抗原。 (b) 在没有 NP-CGG 免疫的情况下,没有观察到过继输注的初始B1-8i++/- B 细胞的扩增,表明 MBC 的产生是抗原依赖性的。 (c) AM14 Tg Vk8R KI 小鼠在没有过继输注B1-8i++/- B细胞的情况下,即使进行NP-CGG免疫,也不会产生NP特异性MBC。
2021-09-14_11-13-44.jpg (224.62 KB)
(下载次数: 0, 2021-9-14 11:15 上传)



供参考。


信源:Weisel, F., & Shlomchik, M. (2017). Memory B Cells of Mice and Humans. Annual Review of Immunology, 35(1), 255–284. doi:10.1146/annurev-immunol-041015-055531

半年y 看全部
2021-10-10 22:11:53
老师,小鼠的记忆B细胞现在有公认的marker吗,我的样本来源为BALB/c或C57小鼠的脾脏,模型为鼠疟原虫感染,采用CD27基本观察不到在B细胞上的表达
niwanmao 看全部
2021-10-11 08:14:00

引用:

半年y 发表于 2021-10-10 22:11
老师,小鼠的记忆B细胞现在有公认的marker吗,我的样本来源为BALB/c或C57小鼠的脾脏,模型为鼠疟原虫感染, ...

相对公认的还是CD27,是不是抗体克隆号原因?
试试克隆号LG.7F9看看?
半年y 看全部
2021-10-12 22:56:36

引用:

niwanmao 发表于 2021-10-11 08:14
相对公认的还是CD27,是不是抗体克隆号原因?
试试克隆号LG.79F看看?

老师,克隆株是LG.7F9,人/大鼠/小鼠都可用,您可能打错了。我们用的是LG.3A10 人、小鼠可用的。我们用这个染色是没问题的,因为单阳区有很多,成团的表达。主要是双阳基本没有。我也看了您分享的这篇综述的原文,他也是写了CD27是人类标记,鼠中说的是PD-L2或CD80等,但很少很少。
niwanmao 看全部
2021-10-13 07:59:39

引用:

半年y 发表于 2021-10-12 22:56
老师,克隆株是LG.7F9,人/大鼠/小鼠都可用,您可能打错了。我们用的是LG.3A10 人、小鼠可用的。我们用这 ...

对,是7F9,写错了,已纠正。

我看到一些文献也用 CD27区分的。你指的是CD27 和哪个标记双阳?PD-L2还是CD80?

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