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OMIP 075:22色方案检测人类和NHP动物抗原特异性T细胞功能

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-9-21 09:40| 查看数: 191| 评论数: 0|帖子模式

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CD4 + T 细胞,也称为辅助 T 细胞 (Th),能通过促进 B 细胞产生中和抗体并激活其他免疫细胞(如CD8+ T细胞、NK 细胞和巨噬细胞)。为了了解传染病的发病机制并开发合适的疫苗,分析每个 T 细胞亚群的功能很重要。世界各地的研究人员都在积极研究 T 细胞对 SARS-CoV-2 的反应,以阐明 COVID-19 的发病机制。许多关于 COVID-19 疫苗接种的研究都集中在 Th1 和 Th2 反应之间的平衡。由于非人类灵长类动物模型 (NHP) 经常用于与传染病和疫苗开发相关的研究,因此设计不仅适用于人类而且适用于非人类灵长类动物模型的流式细胞仪方案至关重要。

Takuto Nogimori等人在2021年1月份发表的这个22色方案,能同时评估人类和非人类灵长类动物的抗原特异性 CD4+ T 细胞反应,以监测传染病中的免疫反应动力学,并评估针对 COVID-19 的疫苗开发的有效性和安全性。

方案的原理是通过检测趋化因子受体(CXCR3、CCR4、CCR6 和 CXCR5)的表达将 CD4+ T 细胞分为 Th1、Th2、Th17 和外周 Tfh (pTfh)。 此外,还包括活化标志物 (CD154)、脱颗粒标志物 (CD107a)、细胞因子(IFNγ、TNF、IL-2、IL-4、IL-13、IL-17 和 IL-21)、 趋化因子(MIP-1β/CCL4)和免疫检查点/活化分子(PD-1 和 ICOS)。

方案
20210919_104759.jpg

设门
A-D为人PBMC,E-H为食蟹猴PBMC。
20210919_111732.jpg 20210919_111742.jpg
A图和E图依次圈选单个细胞、淋巴细胞和活CD3+T细胞,接着根据CD4和CD8分出CD4+ 和 CD8+ T 细胞。人的初始和记忆T根据CD27/CD45RO分,食蟹猴的初始和记忆T根据CD28/CD95分。 CD154 用于检测抗原特异性 CD4+ T 细胞。

B图和F图为人类和食蟹猴在 SEB 刺激 6 小时后 CD4+ 记忆细胞中的细胞因子产生和趋化因子受体表达。 CD4 + T 细胞根据独特的趋化因子受体和细胞因子的表达分为 Th1、Th2、Th17、Treg 和 pTfh,例如各类Th的特征性细胞因子 IFNγ (Th1)、IL-4、IL-13 (Th2)、IL-17 (Th17) 和 IL-21 (pTfh),特征性趋化因子受体 CXCR3 (Th1)、 CCR4 (Th2)、CCR6 (Th17) 和 CXCR5 (pTfh),这样就能在CD4+记忆群体中,用 CD154 和各种细胞因子、趋化因子受体、免疫检查点分子两两组合散点图,查看Th亚群的活化情况。

C图和G图是CD154 阳性 CD4+ 记忆T细胞中细胞因子的产生和IFNγ的共表达情况。

D图和H图是CD8+ 记忆T细胞中细胞因子的产生和CD107a共表达情况。



2019年,Donaldson 等人设计的用于恒河猴 PBMC 染色的 18 色方案 (OMIP-052,https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7537-1-1.html) 包括许多细胞因子(IFNγ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13、IL- 17 和 IL-21)、趋化因子受体(CCR7、CXCR3 和 CXCR5)和免疫检查点分子(ICOS 和 PD-1),而Nogimori的方案在此基础上增加了MIP1β、CCR4、CCR6 和 CD107a。另外还有一些 OMIP,例如 OMIP-60 和 OMIP-67,都专注于抗原特异性反应,不过目前这个方案在兼容人和非人类灵长类动物方面是做得相当不错的。


信源:Nogimori T, Moriishi E, Ikeda M, Takahama S, Yamamoto T. OMIP 075: A 22-color panel for the measurement of antigen-specific T-cell responses in human and nonhuman primates. Cytometry A. 2021 Sep;99(9):884-887. doi: 10.1002/cyto.a.24460. Epub 2021 May 27. PMID: 34042267.

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