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检测CD30,哪个方法更好,免疫组织化学还是流式细胞术?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-9-21 14:22| 查看数: 178| 评论数: 0|帖子模式

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CD30,最初称为 Ki-1,由 Stein 等人发现。作为经典霍奇金淋巴瘤 (cHL) 的Reed-Sternberg 细胞特异性标志物。通过对不同类型淋巴瘤中 CD30 的免疫组织化学分析,间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL) 被认为是淋巴瘤的一个独特实体。由于正常样本中,CD30 的表达仅限于正常组织中少量活化的造血细胞,因此CD30可能是 cHL 和 ALCL 的有效治疗靶点。  Brentuximab vedotin (BV),一种 CD30靶向的抗体偶联药物,在难治性或复发性 (R/R) cHL7 的 II 期临床试验中显示出单次治疗后的高疗效,客观缓解率 (ORR) 为 72%,而在 ALCL 中的 ORR 为 86%,从而获得全球批准,包括 FDA(美国)和 PMDA(日本)。目前正在进行多项临床试验,主要针对其联合化疗或免疫检查点抑制剂的疗效。 最近,BV 的治疗应用已扩展到其他 B 细胞和 T 细胞淋巴瘤,包括弥漫性大 B 细胞淋巴瘤(DLBCL) 和 T 细胞淋巴瘤 (TCL)。 在 BV 治疗 DLBCL 和 TCL 的临床试验中,患者的肿瘤细胞上CD30 表达水平无论高低,均有反应。这种 CD30 表达与 BV 疗效之间缺乏相关性的背后原因,目前还不清楚,一种解释是免疫组织化学 (IHC) 检测低水平 CD30 的局限性。另一种解释是可溶性 CD30 (sCD30) 的作用,因为 DLBCL 研究中的所有患者在基线时都具有高 sCD30 水平。据报道CD30通过吞噬作用或通过外泌体形式转移到旁观者细胞,这些旁观者细胞可能会释放游离的药物,从而杀死邻近的肿瘤细胞。

然而,CD30 在淋巴瘤细胞中的表达对于选择含 BV 疗法的患者至关重要。例如,CD30 基因表达水平在达到缓解的 cHL 患者和对BV无反应的患者之间存在差异表达。然而,尚无关于哪种方法适用于检测淋巴瘤标本中 CD30 表达的报告。

Morihiro Higashi等人使用相同的抗 CD30 抗体 (Her-H2) 克隆,比较了常规采用的两种评估 DLBCL 或 TCL 标本中 CD30 蛋白表达的方法——IHC 和流式细胞术 (FCM)。从2003 年 3 月至 2015 年 11 月在埼玉医科大学埼玉医学中心诊断出的 123 名 DLBCL 患者和 28 名 TCL 患者中,根据FCM 数据的可用性选择患者。

IHC方法:福尔​​马林固定、石蜡包埋的组织的 3 µm 切片用二甲苯脱蜡,并在一系列分级酒精中脱水。在热诱导抗原修复(在乙二胺四乙酸缓冲液,pH 8 中 60 分钟)后,将切片与抗 CD30 抗体(Ber-H2,Roche Diagnostics Co., Ltd)一起在 37°C孵育 32 分钟。使用含HQ接头的 OptiView DAB 通用试剂盒检测一抗。

流式细胞术:在手术切除淋巴结后立即制备单细胞悬液,方法是用锋利的手术刀轻柔、反复刮擦组织获得单细胞悬液。

结果
123 名患者中有 10 名 (8.1%) 被排除在外,因为 FCM 样品中不存在淋巴瘤细胞。剩余122名患者样本,作者同时进行流式分析和免疫组化分析,并两者之间的相关性。
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在 DLBCL 和 TCL 中,IHC 和 FCM 之间的 Pearson 相关系数分别为 0.52 和 0.81。 TCL 中的系数计算不包括 ALCL。

IHC 中阳性细胞的百分比略高于 FCM。这可能是因为 IHC 样本中染色阳性的细胞盖住了背景中的阴性细胞,或者 CD30阳性旁观者细胞被误认为是淋巴瘤细胞。因此,流式细胞术的分析结果比IHC可能会更准确。

在3例TCL中,FCM与IHC存在不一致的结果,这3例样本的FCM阳性率低于5%,IHC阳性率高于50%,其中 2 例为 ALCL,1 例为外周 T 细胞淋巴瘤 NOS(但无法排除 ALCL)。在2例 DLBCL 中观察到类似的差异,其中一个病例是 DLBCL 的间变型。原因可能有两个:一是在处理淋巴结时可能未在流式样本获得淋巴瘤细胞。二是淋巴瘤细胞被旁观者细胞包围,很难在细胞悬液中分离出来,据报道,由于非肿瘤T细胞的玫瑰花环效应,经典霍奇金淋巴瘤中的ReedSternberg细胞单细胞样本很难。

这120多例样本提示,FCM 在检测 CD30 表达方面比 IHC 更敏感,但 FCM 中存在一些容易导致假阴性的缺陷,例如样本制备和设门。因此,建议将 IHC 和 FCM结合起来用于 CD30 的定量检测。不过,我个人觉得,文中作者在流式样本的制备上,用手术刀刮擦组织获得单细胞的方法,使得前述第二个原因中的淋巴瘤细胞释放不出来,如果能再完善一些,或许能进一步提高流式的阳性率和比例。提到组织样本的制备,在此顺便推荐一下我们流式中文网的魔滤和魔杵,处理组织效率高、得率高、活力好【魔滤® MagicFilter® 魔杵MagicVajra 套装(200目)】https://j.youzan.com/vRLSAB


信源:Higashi M, et al. Better method for detection of CD30: Immunohistochemistry or flow cytometry? J Clin Exp Hematop. 2021 Sep 10. doi: 10.3960/jslrt.21019. Epub ahead of print. PMID: 34511584.

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