流式中文网 门户 查看主题

OMIP 076:小鼠T细胞、B细胞和抗体分泌细胞亚群分析

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-9-28 08:47| 查看数: 195| 评论数: 0|帖子模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
现在有大量证据表明,产前和产后接触特定类别的微生物刺激,都可以在生命早期的免疫发育过程中提供有益信号,从而预防未来的炎症性疾病。这种有益免疫刺激的主要目标似乎是固有免疫系统,某些类别的微生物刺激可以改变固有免疫细胞的功能状态,从而优化其免疫功能。就目前的研究来看,免疫训练主要对几种固有群体的表型和转录特征产生影响,而相关的下游适应性反应的特征却知之甚少。要知道,对于了解疾病发病机制和治疗效果,适应性免疫同样至关重要。因此,Mincham KT等人设计并优化了一个19参数的流式细胞术方案,以全面和同时区分BALB/c小鼠组织内的T细胞、B细胞和ASC(抗体分泌细胞)亚群,了解其在生命早期是如何响应早期免疫训练的。

根据当前文献和既往研究,该流式细胞术方案的优化阶段对维持免疫稳态的核心 T 细胞、B 细胞和 ASC 亚群的优先级进行了排序,因此,在一定程度上相对强调T细胞和 B 细胞群中的效应、调节和记忆亚群。

对于 T 细胞,外周初始 CD4+ T 细胞向效应 T (Teff) 细胞的转化表现为活化标记 CD25 的上调,同时 CD25 和细胞内 Foxp3 表达的上调对应着外周诱导调节性 T 细胞 (Treg) ,这是先前公认的在微生物衍生的免疫调节后预防过敏性气道炎症的过程。此外,CD44 在 Treg 上的表达与促进功能增强有关,而与 ICOS-Treg 相比,诱导型共刺激 (ICOS)+ Treg 被认为具有更好的抑制能力和白细胞介素 (IL)-10 产生能力。在活化扩增和收缩之后,CD4+ T 细胞通过 CD44 表达的逐渐上调与 CD62L 的瞬时表达同时转变为记忆表型,从而推动中央记忆 (TCM) 和效应记忆 (TEM) T的产生和存储。除了形成外周记忆T细胞外,活化的 CD4+ T 细胞还能够上调 CXCR5、ICOS 和程序性细胞死亡蛋白 1 (PD-1) 的细胞外表达,从而产生高度特化的滤泡辅助T细胞(TFH),这些细胞是在次级淋巴器官内形成生发中心所需的,在亲和力成熟和增殖过程中支持高亲和力 B 细胞产生,并为其提供存活信号。还有一个亚群与 TFH 表型具有同源性,称为滤泡调节性 T (TFR) 细胞,然而,该亚群主要作用是对TFH活性以及随后产生的体液免疫进行抑制。

本方案中的B 细胞和 ASC 亚群的免疫表型特征集中在 CD19 和 B220 的经典表达上。在次级淋巴组织中,B 细胞的抗原特异性活化涉及主要组织相容性复合物 II 类(MHC II 类;小鼠 IA/IE)和 CD80 表达的组成性上调,以及两种免疫球蛋白的膜结合表达(Ig) M 和 IgD。在抗原特异性活化后,B 细胞上调 Synd-1 的表达并分化为两大类 ASC:一是快速产生和短寿命的浆母细胞,一是短寿命的外周浆细胞,两者都具有分泌 IgM 的能力,这两种抗体分泌亚群之间的主要区别是浆细胞上没有经典的成熟 B 细胞标志物 CD19、B220 和 MHC-II。 B 细胞向记忆表型的最终转变导致 Synd-1 表达的丧失,同时程序性细胞死亡蛋白1配体2(PD-L2) 的同步上调,产生表达 IgM+/- IgD 的长寿命次级淋巴样群体,可在重新刺激后迅速分化为 ASC。


方案
2021-09-28_08-25-47.jpg



设门
下图是一例21天龄BALB/c小鼠新鲜分离的脾细胞,从中可看出分析T细胞、B细胞和ASC亚群的策略。

(A–C) 去除细胞碎片、粘连体、非活细胞和基质细胞。 (D) TCRβ-CD19+、TCRβ+CD4+ 和 TCRβ-CD4/CD19-细胞设三个门。
2021-09-28_08-27-00.jpg


TCRβ-CD4/CD19-中分出Synd-1+IgM+浆细胞(E),TCRβ-CD19+中分出Synd-1+IgM+浆母细胞(F)和Synd-1-群体,后者进一步通过PD-L2-MHCII+IgM+IgD+分出活化 B 细胞(G)、PD-L2+IgM+记忆 B 细胞(H)
2021-09-28_08-27-09.jpg


根据CD44/CD62L分出初始、效应记忆和中央记忆 T 细胞(I),根据CD25/FoxP3分出效应T细胞和调节T细胞(J),调节T细胞进一步分出ICOS+CD44+ Treg(K),通过CXCR5、PD-1、ICOS、foxP3等分出(L)T滤泡辅助细胞,和 (M) 滤泡调节 T 细胞。
2021-09-28_08-27-18.jpg


信源:Mincham KT, Young JD, Strickland DH. OMIP 076: High-dimensional immunophenotyping of murine T-cell, B-cell, and antibody secreting cell subsets. Cytometry A. 2021 Sep;99(9):888-892. doi: 10.1002/cyto.a.24474. Epub 2021 Jun 23. PMID: 34159723.

最新评论

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2021-10-27 11:04

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.