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OMIP 077:14色方案区分所有主要的人白细胞群

发布者: niwanmao | 发布时间: 2021-10-9 20:13| 查看数: 205| 评论数: 0|帖子模式

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Maximilian Boesch等人经过几个月的开发和优化,设计了14 色方案,使用表面标记区分出人全血中主要的白细胞群体。

方案
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设门
(i) 使用 CD45 表达对白细胞进行初步区分,(ii) 基于 FSC/SSC 特征排除死细胞和碎片,(iii) 排除粘连体 (iv)排除计数微球污染
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接着,通过CD14/SSC,将 PBMC 与粒细胞分开,接着将CD15+ 粒细胞细分为 CD193-/CD16+/- 中性粒细胞和 CD193+ 嗜酸性粒细胞。

在PBMC中排除了CD3+ T 细胞后,分出CD34+ 祖细胞以及 CD193+ 嗜碱性粒细胞,而在CD34/CD193 双阴性区域中有HLA-DR-CD14-CD56+CD16+/- NK细胞、HLA-DR/CD14 单阳性或双阳性细胞群细胞(包括表达 CD14 和/或 CD16 的单核细胞群以及 CD14/CD16 双阴性细胞群),在CD14-/CD16-细胞中主要有CD19+ B 细胞、CD38++ 浆细胞和 CD1c+ 边缘区 B (MZB) 细胞。 CD19-/CD38dim 部分包含 CD1c+ 髓样树突细胞 (mDC) 和 CD123+ 浆细胞样树突细胞 (pDC)。最后,CD1c/CD123 双阴性细胞分出 CD141+ mDC。
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由于该方案的主要目的是分主群,所以一些下游的免疫细胞亚群,例如调节性 T 细胞和某些固有淋巴细胞,均未包含。该方案旨在作为通用且广泛适用的免疫细胞分析方案,也可进一步扩展用于深入研究活化/耗竭、效应与记忆表型等。然而,该方案中还可分析一些额外的亚群,例如CD3 和 CD56 的组合可以检测 NKT 细胞, CD19 和 CD1c 的组合可以分出 MZB 细胞,还能分析非抗原呈递细胞(如 T 细胞)上的 HLA-DR 表达,分出HLA-DR 和 CD38 双阳性的活化T细胞。

方案中放弃了死细胞鉴别标记的使用,因为血液中的细胞活力通常很高,因此通过 FSC/SSC 特征排除死细胞基本上都够用。不过,如果将该方案用于分析其他组织来源的白细胞,则需使用死细胞标记(尤其是在组织解离后)。

如果将该方案用于12 色 FACSLyric (BD Biosciences) 和 13 色 DxFLEX (Beckman Coulter)时,可修改一下方案,去掉CD15和CD193,改用SSC/自发荧光/CD16区分中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。

信源:Boesch M, Sykora M, Gasteiger S, Baty F, Brutsche MH, Sopper S. OMIP 077: Definition of all principal human leukocyte populations using a broadly applicable 14-color panel. Cytometry A. 2021 Jul 14. doi: 10.1002/cyto.a.24481. Epub ahead of print. PMID: 34260151.

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