临床应用

1060 dingjing LV2

悬赏 1 流星 未解决
各位老师好,本人实验室小白一枚,近期在做有关血小板活化及聚集功能检测,活化功能采用的是CD41、CD62p、CD63抗体进行标记,聚集功能使用的CD14、CD41进行标记。但似乎检测结果表达率不是很理想,请各位老师帮忙分析一下?谢谢!
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有 10 条回复

2楼 niwanmao 管理组

你这里认为不理想的评价标准是什么?

3楼 dingjing 楼主

引用: niwanmao 发表于 2021-11-1 08:34
你这里认为不理想的评价标准是什么?

倪老师您好,我参考过既往关于血小板活化和聚集能力测定类似的研究,国内国外的文献都了解过。在实验条件类似的情况下,对比他们最后给出来的数据,发现自己目前做的均值跟他们差别很大,我的样本总体是表达率偏低的。虽然知道没有用过激动剂血小板的活化表达不高,但是感觉自己的实验组和对照组都特别低。上图是其中一份样本,表达算相对较高的,其余的样本,CD62P CD63大概只有1%左右。而血小板聚集(CD14 CD41双阳表达)普遍特别高,60%-80%间。既往文献,在实验和对照基线类似的情况下,血小板活化大概都是在20%左右(同样不用激动剂的情况下)。因为自己是用全血做的,不知道是不是用PRP会好一点?请倪老师加以指点

4楼 niwanmao 管理组

引用: dingjing 发表于 2021-11-1 21:44
倪老师您好,我参考过既往关于血小板活化和聚集能力测定类似的研究,国内国外的文献都了解过。在实验条件 ...

血小板我自己没怎么做过,没法给你非常具体的指导,之前编译过一篇文献,你可以从这些步骤中找找看自己目前的方法是否存在什么缺陷?

血小板活化、染色和分析
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3905-1-1.html
(出处: 流式中文网)

5楼 overcome1996 LV2

这里CD14表征的是单核细胞-血小板聚集?

6楼 niwanmao 管理组

引用: overcome1996 发表于 2021-11-10 15:28
这里CD14表征的是单核细胞-血小板聚集?

CD14和CD41共表达

7楼 overcome1996 LV2

引用: niwanmao 发表于 2021-11-10 19:15
CD14和CD41共表达

倪老师,请问这里讲的聚集指的是血小板-白细胞(单核细胞)聚集吗?我在pubmed上查到关于CD14和CD41共表达的情况(共10篇文献)都是表征这一参数。另外,对比静息状态的血小板,剪切力诱导能使血小板聚集(圈出CD61+后,通过FSC-H和FSC-A,即排粘连体的方式衡量聚集)。不知这种方式衡量的聚集是否科学。

8楼 niwanmao 管理组

引用: overcome1996 发表于 2021-11-10 23:50
倪老师,请问这里讲的聚集指的是血小板-白细胞(单核细胞)聚集吗?我在pubmed上查到关于CD14和CD41共表 ...

是的,血小板和白细胞聚集提示了血小板体内活化水平。至于您所说的剪切力导致的人为活化,这是平时检测中需控制的一个因素,这也是为什么这个检测难做和难以标准化的原因,但是意义还是有的。

9楼 dingjing 楼主

引用: niwanmao 发表于 2021-11-2 12:52
血小板我自己没怎么做过,没法给你非常具体的指导,之前编译过一篇文献,你可以从这些步骤中找找看自己目 ...

倪老师,我用全血做血小板活化表达,CD41阳性率比较低,后面咨询了一下老师说是可以将新鲜全血静置20min左右吸取血浆和红细胞中间层血小板进行孵育。因为我不加激动剂,又怕做PRP会在离心的时候人为血小板活化掉。这样做结果出来确实提高了CD41表达,但是不知道这样是否符合规范?

10楼 niwanmao 管理组

引用: dingjing 发表于 2022-2-27 16:52
倪老师,我用全血做血小板活化表达,CD41阳性率比较低,后面咨询了一下老师说是可以将新鲜全血静置20min ...

41应该是不受活化影响,CD62P、CD63才是主要的。
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