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1035 zhuw LV1

悬赏 1 流星 已解决
使用cytoflex lx跑的流式,PE通道,fsc  ssc  pe的增益均设为20,觉得细胞去粘连后整体形态还可以,但是CV值都过大,是否是因为pe的增益值设得太大了,还是由于细胞处理过程中有问题呢

                               
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niwanmao 查看完整内容

CV主要受获取样本时的速度、激光器校准这两个因素影响。 所以只要平时做好激光器的校准(仪器日常维护应该会报告这个指标的),获取的时候用低速获取,CV会小的。
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有 9 条回复

2楼 niwanmao 管理组

引用: zhuw 发表于 2022-1-8 20:53
那在样品制备的过程中,还有哪些注意点可以帮助减小CV值呢,以及减小pe通道的增益值,是否对减小CV有帮助 ...

CV主要受获取样本时的速度、激光器校准这两个因素影响。
所以只要平时做好激光器的校准(仪器日常维护应该会报告这个指标的),获取的时候用低速获取,CV会小的。

3楼 zhuw 楼主

本帖最后由 zhuw 于 2022-1-6 22:29 编辑

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4楼 niwanmao 管理组


CV会跟很多因素有关,上图中,主要与粘连体过多有关(5.37%),如果你已确认排除掉了,请将Aggregates关掉即可。

5楼 wxd LV4

这个细胞周期,峰有点奇怪,楼主能不能详细说一下包括细胞处理、染色以及分析的步骤,好进行分析,或者上传一下fsc格式的文件,大家一起讨论一下。

6楼 zhuw 楼主

引用: wxd 发表于 2022-1-7 13:03
这个细胞周期,峰有点奇怪,楼主能不能详细说一下包括细胞处理、染色以及分析的步骤,好进行分析,或者上传 ...

细胞使用的是hepG2 慢病毒稳转株,按照凯基的细胞周期试剂盒操作流程做的,12孔板铺板,消化离心pbs洗涤后,用75%乙醇固定4°过夜,第二天离心弃固定液,加入pi:RNase 9:1的工作液染色1小时,200目过筛后上机跑流式。

    CON3-3.zip  (2022-1-7 21:36 上传)

    707.04 KB, 下载次数: 8

7楼 zhuw 楼主

引用: niwanmao 发表于 2022-1-7 09:01
CV会跟很多因素有关,上图中,主要与粘连体过多有关(5.37%),如果你已确认排除掉了,请将Aggregates关 ...

老师您好,似乎把粘连的取消勾选后,CV值过大没有改善,我是否需要在调节荧光通道增益的时候,确保G1峰在某一个固定值附近?

8楼 niwanmao 管理组

引用: zhuw 发表于 2022-1-7 21:47
老师您好,似乎把粘连的取消勾选后,CV值过大没有改善,我是否需要在调节荧光通道增益的时候,确保G1峰在 ...

看起来你的数据CV可能无法减小的,RCS已经足够好了。RCS我相对更看重一些,因为是反映曲线吻合度的。

9楼 zhuw 楼主

引用: niwanmao 发表于 2022-1-8 10:56
看起来你的数据CV可能无法减小的,RCS已经足够好了。RCS我相对更看重一些,因为是反映曲线吻合度的。 ...

那在样品制备的过程中,还有哪些注意点可以帮助减小CV值呢,以及减小pe通道的增益值,是否对减小CV有帮助呢?

10楼 zhuw 楼主

引用: niwanmao 发表于 2022-1-9 14:14
CV主要受获取样本时的速度、激光器校准这两个因素影响。
所以只要平时做好激光器的校准(仪器日常维护应 ...

后续重新再做了一次,一样的流程,把pe通道的增益值调小了一些,最后拟合出来的CV值就比较理想了