流式杂谈

351 niwanmao 楼主

细胞分离
  • 浸泡在HBSS(或PBS)中机械解离脾脏、淋巴结(LNs)等。
  • 通过轻轻破坏组织并经70 μm过滤器过滤,形成单细胞悬液。
  • 推荐:可以使用红细胞裂解(配方在流式中文网站内搜)对脾脏样本进行红细胞裂解。
  • 在流式缓冲液(一般是含0.2%BSA的PBS)中重悬细胞并计数。

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有 6 条回复

推荐 半年y LV3

引用: 半年y 发表于 2022-5-14 20:43
学到了,实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳,例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图,我自己也做过二者 ...

但是CXCR5的分群效果其实并不好,不会像这个文章中有一个这么明显的双阳,经常会两个峰分不开,好像是因为趋化因子受体容易收到操作影响

3楼 半年y LV3

学到了,实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳,例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图,我自己也做过二者双染,阳性率非常高,的确需要排除B细胞。同时我通常把Treg和Tfh做在一个配伍里,选择Foxp3-的细胞设门,可以去除Tfr细胞

4楼 ruoyi LV2

积分不够,看不到

5楼 Climber LV2

倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥

6楼 niwanmao 楼主

引用: Climber 发表于 2022-5-27 21:34
倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥 ...

趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响,所以推荐保持细胞良好活力的时候,先染好。

7楼 Climber LV2

引用: niwanmao 发表于 2022-5-28 14:17
趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响,所以推荐保持细胞良好活力的时候,先染好。 ...

谢谢解答